本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种改变底物通道酸碱性的催化活性提高的壳聚糖酶突变体。基于底物通道调控的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶BsCsn46A，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的壳聚糖酶的第49位丙氨酸突变为碱性氨基酸赖氨酸，所述突变体为A49K。本发明的壳聚糖酶突变体与野生型壳聚糖酶相比，该突变体以壳聚糖为底物，催化活性比野生型提高了1.13倍。
本发明属于酶工程技术领域，公开了单产壳二糖的壳聚糖酶突变体。对来源于枯草芽孢杆菌中克隆的新的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示进行定点突变，壳聚糖酶的突变体为G21W、E235R、Y236K，通过水解反应分析，发现与原始酶水解壳聚糖的产物为壳二糖（COS2）和壳三糖（COS3）不同的是，本发明的突变体壳聚糖酶的水解产物主要为COS2。
本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种改变产物聚合度的壳聚糖酶突变体及其应用。将来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，第50位苏氨酸突变成大体积疏水侧链氨基酸W或小体积侧链氨基酸A；突变体分别为T50A、T50W。与原始酶相比，壳聚糖酶突变体酶水解壳聚糖除产生COS2和COS3外，还有壳四糖（COS4）生成。
本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种产壳四糖的壳聚糖酶突变体。所述壳聚糖酶来源于枯草芽孢杆菌的46家族糖苷水解酶壳聚糖酶（BsCsn46A），以氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的壳聚糖酶BsCsn46A为出发酶，通过计算机辅助模拟分析壳聚糖酶底物通道，同时将BsCsn46A与底物进行分子对接，确定可能会对壳聚糖酶水解产物聚合度有影响的氨基酸位点，对这些氨基酸位点进行定点突变，分别突变成酸性氨基酸E（谷氨酸）及碱性氨基酸K（赖氨酸）。本发明获得两种壳聚糖酶突变体T50E和E203K，与原始酶相比，突变体酶水解壳聚糖除产生COS2和COS3外，还有壳四糖（COS4）生成。
