本发明属于生物技术领域,公开了一种引物组和探针,包含核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑6所示的FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB组成的引物组以及如SEQ ID NO:7‑8所示的荧光探针probe和淬灭探针Quencher,该引物组能够对猪流行性腹泻病毒野毒株、疫苗株均进行扩增,对于野毒株的ORF3基因保守区域开发出荧光引物,用于进行荧光的特征性反应,实现了对猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的高特异性、敏感性的快速定量检测。同时,本发明还提供了一种试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法。