[发明专利]含有特异性分子靶标的空肠弯曲菌标准菌株及其检测和应用有效
| 申请号： | 202011611248.3 | 申请日： | 2020-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN112899379B | 公开（公告）日： | 2022-05-20 |
| 发明（设计）人： | 王涓;吴清平;丁郁;陈谋通;薛亮;张菊梅;曾海燕;叶青华;吴诗;张淑红;庞锐;雷涛;古其会;张友雄;韦献虎;陈惠元;相欣然;汪智;唐胜君;陈鲁 | 申请（专利权）人： | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）;广东环凯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12N1/20;C12N1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;周全英 |
| 地址： | 510070 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 特异性 分子 靶标 空肠 弯曲 标准 菌株 及其 检测 应用 | ||
【说明书】：
本发明提供了3株空肠弯曲菌，所述菌株346‑1C保藏号为GDMCC 60857，菌株3853‑1A的保藏号为GDMCC 60858，菌株542‑1A的保藏号为GDMCC 60859；同时还提供了分别用于检测3株特异性空肠弯曲菌的特异性分子靶标，所述分子靶标包括如SEQ ID NO:1～3所示的核苷酸序列。所述菌株具有标准的空肠弯曲菌菌体显微形态和生理生化特征，可用于检验空肠弯曲菌显色平板的准确性，以及相关试剂验证的标准菌株。本发明还提供了一种冻干保护剂，具有成型好，外观漂亮且水溶性好，1‑2秒内能够完全溶解；在‑20℃条件下可以保存至少一年以上，能够保证其数量级不发生变化，可用于长期储存质控菌株。
技术领域
本发明属于微生物检验技术领域，具体涉及检测空肠弯曲菌特异性分子靶 标以及含有该靶标的标准菌。
背景技术
腹泻性疾病是世界范围内的一个重要公共卫生问题，每年因感染性腹泻死 亡的人数超过200万，而在发展中国家，每年因腹泻性疾病死亡的人数高达1000 万，给全球公共卫生行业造成了巨大经济损失，也给人民的生命健康构成了重 要威胁。空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和动物发生多种疾 病，并且是一种食物源性病原菌，被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要 原因。空肠弯曲菌广泛存在肉与肉制品中，尤其是禽肉中，是我国常见重要的 食源性致病菌。空肠弯曲菌的致病机理以及其致病因素包括粘附、侵袭、产生 毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症 一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素 和细胞致死性膨胀毒素而致病。了解该菌的流行特征及遗传进化是有效防控该 菌所致的食源性疾病的基础，而是否使用了合适的标准菌株决定了研究结果的 可靠性，目前空肠弯曲菌的标准菌株主要来源美国的美国微生物菌株保藏中心 (American Type CultureCollection，ATCC)，我国医学微生物菌种中心(CMCC)并没有保存空肠弯曲菌。
2015年5月1日后，我国食品中空肠弯曲菌检验主要执行 GB/T4789.9—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验》国 家标准。空肠弯曲菌的鉴定主要采用传统的生化鉴定方法。主要通过氧化酶、 过氧化氢酶、马尿酸盐水解和吲哚乙酸酯水解试验，进而确认是否为空肠弯曲 菌。目前，我国仍缺乏代表性的食品分离株作为标准对照菌株，现用标准菌株 大部分源于ATCC，ATCC的标准菌株一般是从临床上分离得到的，与食源性空 肠弯曲菌菌株在致病能力和基因型都不同，且与中国分离得到的菌株在性状上 有所差别，不能代表所有空肠弯曲菌的特性，更不能代表中国空肠弯曲菌的特 征，尤其是食源性空肠弯曲菌。在中国CMCC网站上不能检索到弯曲菌属的任 何菌株，具有中国本土来源的标准菌株资源十分缺乏，具有食品源的菌株更是 缺乏，因此，构建国内具有代表性的空肠弯曲菌标准菌株是十分有必要的。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了3株空肠弯曲菌中国地区的食品分离 菌株，该菌株具有典型的空肠弯曲菌生理生化特性，且能较好地反映该菌在中 国地区的遗传背景，能弥补中国地区无食源性空肠弯曲菌标准菌株可用的空缺。 空肠弯曲菌菌株346-1C是分离于中国杭州市万寿亭农贸市场的鸽子肉样品，其 保藏编号为：GDMCC 60857，分类名为：Campylobacter jejuni；空肠弯曲菌菌 株3853-1A是分离于中国银川市北京华联南门广场店鸡肉样品，保藏编号为： GDMCC 60858，分类名为：Campylobacter jejuni；空肠弯曲菌菌株542-1A是分 离于中国拉萨药王山农贸市场鸽子肉样品，其保藏编号为：GDMCC60859，分 类名为：Campylobacter jejuni。上述分离获得的空肠弯曲菌菌株346-1C、3853-1A、 542-1A均保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：中国广州市先烈中路100 号省微生物所实验楼五楼，保藏日期：2019年10月27日。
本发明采用的技术方案为：
本发明提供了用于检测空肠弯曲菌的特异性分子靶标，所述分子靶标为：
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- 本发明公开了一种用于特异性定量普通高温放线菌的分子标记和试剂盒及其应用，属于生物工程领域。本发明提供了SEQ ID NO：4所示的分子标记作为鉴定或特异性定量普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)的标志物的应用。本发明通过实验发现可定性鉴定或特异性定量普通高温放线菌的分子标记，该分子标记作为标志物可以准确识别普通高温放线菌，并可特异性定量普通高温放线菌。同时，本发明还提供了以此分子标记和扩增该标记的引物制备的试剂盒和精准检测样品中普通高温放线菌的方法；该试剂盒或特异性定量普通高温放线菌的方法，检测特异性好，有效性高，可以快速准确定性或定量普通高温放线菌，有助于在酿造生产过程或酿造产品中对该细菌进行定性或特异性定量监测。
- 一种用于极低丰度结核分枝杆菌检测的高灵敏度巢式PCR检测方法及应用-202311005496.7
- 黄晓颖;叶方富;张乐翔;郑瑞轩;施可庆 - 温州医科大学附属第一医院
- 2023-08-10 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明提供一种用于极低丰度结核分枝杆菌检测的高灵敏度巢式PCR检测方法及应用，包括引物探针组，以及利用该引物探针组所制备检测试剂盒等应用，本发明提供的巢式PCR引物探针组方便检测结核分枝杆菌并且辅助检测耐多药结核分枝杆菌，且其使用和操作成本较低，具有良好的应用前景。
- 一种基于舌拭子的结核分支杆菌检测方法及试剂盒-202311170303.3
- 夏涵;张烨;金禄懿;郭李平;樊淑;张祥丽 - 予果生物科技（北京）有限公司;予果智造科技（北京）有限公司
- 2023-09-12 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于核酸检测技术领域，涉及一种基于舌拭子的结核分支杆菌检测方法及试剂盒。本发明提供了用于实时荧光定量PCR检测结核分支杆菌的2组引物探针组合，分别针对IS6110序列和IS1081序列。本发明提供的试剂盒适用于舌拭子，并对核酸提取试剂和扩增反应试剂进行了优化，灵敏度和特异性高，能有效实现对样品的定性定量检测，极大的降低了结核的漏诊率。
- 一种用于检测大熊猫三种致病菌的引物组合、试剂盒及其检测方法-202311049793.1
- 苏小艳;刘颂蕊;燕霞;刘圣;曹立亭;杨梅;岳婵娟;范雪阳;李运莉;张东升;李林;张洪文 - 成都大熊猫繁育研究基地
- 2023-08-18 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明公开了一种用于检测大熊猫三种致病菌的引物组合、试剂盒及其检测方法。其中，引物序列如SEQ ID NO.1～6所示。本发明建立的多重PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性和抗干扰性，检出率优于病原分离鉴定法，极大的提高了检出效率，可为大熊猫种群三种细菌性疾病感染的快速诊断及流行病学调查提供技术支持，具有重要的临床意义。
- 一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒-202210533343.9
- 肖利力;贾欣月;刘翌;康洁;金鑫浩;蔡亦梅;张瑜;高静;范东雨;任鲁风 - 北京中科生仪科技有限公司;北京璘客生物科技有限公司
- 2022-05-13 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测斑疹伤寒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用一体化芯片上微流控的方式集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。
- 一种鼠疫耶尔森菌检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒-202210543236.4
- 康洁;刘建礼;贾欣月;金鑫浩;张瑜;高静;蔡亦梅;范东雨;任鲁风 - 北京中科生仪科技有限公司;北京璘客生物科技有限公司
- 2022-05-13 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种鼠疫耶尔森菌检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测鼠疫耶尔森菌，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用微流控芯片技术，通过集核酸提取、纯化、扩增和检测为一体的方式，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。
- 检测不同生殖道病原体的组合物、试剂盒、方法及其用途-202310786516.2
- 向丽蓉;张萌;任小梅;吴康;戴立忠 - 圣湘生物科技股份有限公司
- 2023-06-29 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及生殖道感染相关病原菌的检测，更具体地，涉及微小脲原体、大肠杆菌、粪肠球菌和乳杆菌的检测。本发明提供的联检的组合物，主要利用多重荧光PCR分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实现微小脲原体、大肠杆菌、粪肠球菌和乳杆菌的检测和区分。本发明的组合物，其检测的灵敏度高，达到500拷贝/mL，特异性好，检测更为准确。
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