本发明公开了一种检测耐甲氧西林金葡菌的CPA引物及其检测试剂盒和检测方法,该CPA引物是针对两个靶点femA及mecA设计的,包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s,以及特异引物2a、3a,引物序列如前文SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.10所示;其检测方法是建立检测femA和mecA的交叉引物恒温扩增反应体系,进行交叉引物恒温扩增反应,观察两个反应体系颜色变化,若两个反应体系颜色都变为绿色,说明待检测样品中含有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;否则说明检测样品中不含有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。本发明的引物和方法检测时间快,可以在60分钟左右获得检测结果;此外,检测灵敏度高,达到fg/μL的级别。
本发明公开了一种检测大肠杆菌I型志贺毒素的交叉引物恒温扩增反应引物、试剂盒及方法。本发明针对stx1靶点设计了一组检测大肠杆菌志贺毒素I型的CPA引物,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1~5所示。本发明还提供了一种检测大肠杆菌I型志贺毒素的方法,该方法在恒温条件下进行反应,具有灵敏度高、适用面广,特异性好,操作简便,准确度高,检测结果可靠,检测成本低等优点,凭肉眼判断结果,适用中小型单位及现场检测,对等温扩增技术全面走向市场具有重大意义。
本发明公开了一种基于聚合酶螺旋反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素SEB的引物、试剂盒与方法。本发明中针对金黄色葡萄球菌肠毒素SEB设计了特异性引物对,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了一种基于聚合酶螺旋反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素SEB的方法,该方法在等温条件下扩增,不会因为变温而耗费大量的时间,反应迅速、所需时间短、灵敏度高、特异好、操作简便快捷,可凭肉眼判断检测结果,解决了现有技术检测时间长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷,对新型恒温扩增技术扩增的开发及微生物的现场检测具有重要的意义。
本发明公开了一种PSR等温扩增反应检测副溶血性弧菌的引物、试剂盒及其方法。本发明针对副溶血性弧菌特异性靶序列tlh设计了一对检测引物Ft/Bt和一对加速引物IF/IB,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~4所示,该引物保证了检测结果的可靠性。本发明中还提供了一种PSR等温扩增反应检测副溶血性弧菌的试剂盒,其具有灵敏度高、特异性好,操作简便快速,结果准确可靠,检测成本低,适合中小型单位及现场检测应用的特点。本发明利用试剂盒对单增李斯特菌进行聚合酶螺旋反应的检测,该方法不会因温度的改变而造成时间损失,耗时短,扩增产物不需要凝胶电泳,直接用荧光染料显色后可凭肉眼判断结果。
本发明公开了一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的引物、试剂盒与方法。本发明针对耐热直接溶血毒素阳性的副溶血弧菌的特异性靶序列tdh及trh保守区的特异区域各设计了一对检测引物,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~4所示,该引物对于副溶血弧菌耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素均可实现快速、准确的检出,且适用性好。发明中还提供了一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的试剂盒,利用该试剂盒对待测样品进行检测时,可以通过显色剂对结果直接进行肉眼判读,期操作简便快捷,结果准确,检测成本低。
本发明公开了一种基于聚合酶螺旋反应恒温检测单增李斯特菌的引物、试剂盒及检测方法。该引物包括检测引物Ft和Bt;其中,检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了一种基于聚合酶螺旋反应恒温检测单增李斯特菌的试剂盒,该试剂盒包括上述引物,Bst DNA聚合酶,以及钙黄绿素和氯化锰的混合溶液等。利用上述引物或试剂盒能对单增李斯特菌进行聚合酶螺旋反应的检测,不会因温度的改变而造成时间损失,耗时短,反应过程简便、检测周期短、特异性强、可用肉眼观察检测结果。本发明对新型恒温扩增技术扩增的开发及微生物的现场检测具有重要的意义。
本发明公开了产肠毒素B(SEB)金黄色葡萄球菌的CPA检测引物及其检测试剂盒和方法。该CPA引物包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s,以及特异引物2a、3a;其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明中所提供的针对金黄色葡萄球菌肠毒素B基因序列所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系,解决现有技术方法所需周期长,灵敏度低,成本高,现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的肠毒素B基因序列的保守区域,设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系,并在60分钟左右获得检测结果以缩短传统检测产肠毒素B金黄色葡萄球菌的周期。
本发明公开了单增李斯特菌的CPA引物、检测试剂盒和检测方法,该引物包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s,以及特异引物2a、3a;其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑NO.5所示。本发明针对单增李斯特菌特异性靶序列hlyA所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系,解决了现有的检测技术方法耗时长,灵敏度低,成本高,现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的特异性序列hlyA的保守区域,设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系,并在60分钟左右获得检测结果以缩短传统单增李斯特菌检测的周期。
本发明公开了一种检测肠毒素SEA的PSR引物、检测试剂盒和检测方法,所述引物包括检测引物Ft和检测引物Bt,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明针对肠毒素SEA设计的PSR检测引物和方法解决了现有技术方法所需周期长,灵敏度低,成本高,现场应用困难等问题。通过选择目标菌株的SEA肠毒素特异性序列的保守区域,设计一对检测引物Ft和Bt构建PSR反应体系,并在60分钟左右获得检测结果,较传统MRSA肠毒素的检测方法大大缩短了检测周期。
本发明公开了一种杀白细胞毒素阳性金黄色葡萄球菌的CPA引物及其检测试剂盒和检测方法,针对靶点pvl设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s,以及特异引物2a、3a;其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明针对金葡杀白细胞毒素特异性靶序列pvl设计了一对剥离引物、交叉引物和特异引物,构建了交叉引物恒温扩增反应体系,60分钟左右就能实现对携带杀白细胞毒素基因pvl金葡菌的检测,并且检测限达到pg/μL的级别,克服了现有检测技术周期长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷。
本发明公开了一种沙门氏菌的CPA检测引物及检测试剂盒和检测方法,该针对靶点invA设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s,以及特异引物2a、3a;其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。本发明中所提供的针对沙门氏菌特异性靶序列invA所设计的交叉引物恒温扩增反应检测鉴定体系,解决了现有技术方法所需周期长,灵敏度低,成本高,现场应用困难等缺陷。通过选择目标菌株的特异性序列invA的保守区域,设计一对剥离引物、交叉引物和特异引物构建交叉引物恒温扩增反应体系,可在60分钟左右获得检测结果以缩短传统沙门氏菌检测的周期。