本发明涉及一种耐热β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体及其制备方法与应用,属于酶工程技术领域。一种耐热β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明的β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体是在原始酶的基础上,将其氨基酸序列第9位的苏氨酸(Thr)和第43位的甘氨酸(Gly)突变成半胱氨酸(Cys)得到的。与原始酶相比,显著提高了酶的最适反应温度,由60℃提升到了75℃,还在一定程度上增加了突变酶EccslG69金金属离子耐受性,拓宽了耐热β‑1,3‑1,4‑葡聚糖酶突变体应用范围及应用潜力。
本发明提供了一种能够快速检测普鲁兰多糖的基因构建及应用方法,主要涉及内容为一种融合蛋白PULLa‑CBM1编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,一种融合蛋白CBM1‑PULLb编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述融合蛋白PULLa‑CBM1和融合蛋白CBM1‑PULLb在检测普鲁兰多糖中的应用,本发明提供的融合蛋白PULLa‑CBM1和CBM1‑PULLb能够与普鲁兰多糖特异性结合,并产生荧光,能够用于普鲁兰多糖的检测。