[发明专利]一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的引物、试剂盒与方法有效
| 申请号： | 201811587975.3 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN109517913B | 公开（公告）日： | 2022-08-16 |
| 发明（设计）人： | 刘丽艳;徐振波;徐瑞瑞;徐行勇;刘君彦;陈玲;苏健裕;李冰;李琳;李晓玺;张霞 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 刘瑜 |
| 地址： | 511458 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 psr 检测 耐热 直接 溶血 毒素 相关 引物 试剂盒 方法 | ||
【说明书】：
本发明公开了一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的引物、试剂盒与方法。本发明针对耐热直接溶血毒素阳性的副溶血弧菌的特异性靶序列tdh及trh保守区的特异区域各设计了一对检测引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示，该引物对于副溶血弧菌耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素均可实现快速、准确的检出，且适用性好。发明中还提供了一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的试剂盒，利用该试剂盒对待测样品进行检测时，可以通过显色剂对结果直接进行肉眼判读，期操作简便快捷，结果准确，检测成本低。
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的引物、试剂盒与方法。
背景技术
副溶血弧菌是一种重要的食源性致病菌，人们食用受该菌污染的食物后会引起腹泻、呕吐等症状，甚至导致脱水、休克及死亡。目前，副溶血弧菌引起食物中毒的发生规模呈明显扩大趋势。而耐热直接溶血毒素(thermostable direct hemolysin，TDH)或耐热相关溶血毒素(thermostable related hemolysin，TRH)是副溶血弧菌的毒力因子之一，其毒性最强，可以引起红细胞溶血，破坏细胞膜和溶酶体。
目前TDH及TRH的检测主要有传统的纸片法，以分子生物技术的PCR方法，还有以免疫学为主的酶联免疫试剂盒检测方法，以及最新出现的基因芯片检测手段。常规检测鉴定方法工作量相对较大，且检测结果耗时长，需要根据实验现象判断鉴定结果，很难满足快速鉴定的需要。近年发展起来的基因芯片检测及PCR扩增方法具有较强的特异性、快速、灵敏，但是成本较高。免疫学检测方法，如ELISA，免疫层析等，灵敏度高，但是操作过程复杂，成本偏高，不宜于大规模检测样品。目前应用最广泛的恒温扩增技术(LAMP)也有它的局限性，如成本高、耗时长、不稳定和易污染等不足。因此，迫切需要一种新型的快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素的方法。
聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction，PSR)技术与其他核酸扩增技术相比，可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要精准的变温设备，成本较低，在食源性微生物检测领域显示出广阔的发展前景。
要实现有效地利用PSR技术，合适的引物设计是研发关键；同时，由于PSR一般通过显色直接进行结果判读，显色体系对于整个PSR扩增反应结果判读具有重要的影响，而在本领域的研发实践中如何通过简单的显色实现准确、快速的结果判读也是目前亟需攻克的技术难题。
因此，建立一种针对耐热直接溶血毒素及耐热相关毒素的新型的具有独立知识产权的等温核酸扩增检测方法具有重要的意义。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的引物。
本发明的另一目的在于提供一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的试剂盒。
本发明的再一目的在于提供一种PSR检测耐热直接溶血毒素及耐热相关溶血毒素的方法。该方法具有灵敏度高、特异性好，操作简便快速，结果准确可靠，检测成本低，适合现场快速检测应用的特点。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种PSR检测耐热直接溶血毒素(thermostable direct hemolysin，TDH)及耐热相关溶血毒素(thermostable relatedhemolysin，TRH)的引物，包括靶点tdh检测引物Ft和Bt，以及靶点trh检测引物Ft和Bt，其核苷酸序列如下所示：
靶点tdh检测引物Ft：
5’-AGACCTTTACATTGACCGCTTCCATCTGTCCCTTTTCC-3’(SEQ ID NO.1)；
靶点tdh检测引物Bt：
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- 本发明提供一种用于极低丰度结核分枝杆菌检测的高灵敏度巢式PCR检测方法及应用，包括引物探针组，以及利用该引物探针组所制备检测试剂盒等应用，本发明提供的巢式PCR引物探针组方便检测结核分枝杆菌并且辅助检测耐多药结核分枝杆菌，且其使用和操作成本较低，具有良好的应用前景。
- 一种基于舌拭子的结核分支杆菌检测方法及试剂盒-202311170303.3
- 夏涵;张烨;金禄懿;郭李平;樊淑;张祥丽 - 予果生物科技（北京）有限公司;予果智造科技（北京）有限公司
- 2023-09-12 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于核酸检测技术领域，涉及一种基于舌拭子的结核分支杆菌检测方法及试剂盒。本发明提供了用于实时荧光定量PCR检测结核分支杆菌的2组引物探针组合，分别针对IS6110序列和IS1081序列。本发明提供的试剂盒适用于舌拭子，并对核酸提取试剂和扩增反应试剂进行了优化，灵敏度和特异性高，能有效实现对样品的定性定量检测，极大的降低了结核的漏诊率。
- 一种用于检测大熊猫三种致病菌的引物组合、试剂盒及其检测方法-202311049793.1
- 苏小艳;刘颂蕊;燕霞;刘圣;曹立亭;杨梅;岳婵娟;范雪阳;李运莉;张东升;李林;张洪文 - 成都大熊猫繁育研究基地
- 2023-08-18 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明公开了一种用于检测大熊猫三种致病菌的引物组合、试剂盒及其检测方法。其中，引物序列如SEQ ID NO.1～6所示。本发明建立的多重PCR检测方法具有良好特异性、灵敏性和抗干扰性，检出率优于病原分离鉴定法，极大的提高了检出效率，可为大熊猫种群三种细菌性疾病感染的快速诊断及流行病学调查提供技术支持，具有重要的临床意义。
- 一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒-202210533343.9
- 肖利力;贾欣月;刘翌;康洁;金鑫浩;蔡亦梅;张瑜;高静;范东雨;任鲁风 - 北京中科生仪科技有限公司;北京璘客生物科技有限公司
- 2022-05-13 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测斑疹伤寒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用一体化芯片上微流控的方式集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。
- 一种鼠疫耶尔森菌检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒-202210543236.4
- 康洁;刘建礼;贾欣月;金鑫浩;张瑜;高静;蔡亦梅;范东雨;任鲁风 - 北京中科生仪科技有限公司;北京璘客生物科技有限公司
- 2022-05-13 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种鼠疫耶尔森菌检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测鼠疫耶尔森菌，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用微流控芯片技术，通过集核酸提取、纯化、扩增和检测为一体的方式，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。
- 检测不同生殖道病原体的组合物、试剂盒、方法及其用途-202310786516.2
- 向丽蓉;张萌;任小梅;吴康;戴立忠 - 圣湘生物科技股份有限公司
- 2023-06-29 - 2023-10-20 - C12Q1/689
- 本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及生殖道感染相关病原菌的检测，更具体地，涉及微小脲原体、大肠杆菌、粪肠球菌和乳杆菌的检测。本发明提供的联检的组合物，主要利用多重荧光PCR分析方法，通过检测不同病原体上的靶点，对不同病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实现微小脲原体、大肠杆菌、粪肠球菌和乳杆菌的检测和区分。本发明的组合物，其检测的灵敏度高，达到500拷贝/mL，特异性好，检测更为准确。
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