[发明专利]南蛇藤提取物含药血清对HBV和MIF作用的研究方法在审
| 申请号： | 201810575203.1 | 申请日： | 2018-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN110564835A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 屈正;邵馨怡;邱朋;王梓峄;范睿 | 申请（专利权）人： | 屈正 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 37108 山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 | 代理人： | 刘栋栋 |
| 地址： | 250002 山东省济南市市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 南蛇藤 含药血清 提取物 人骨髓间充质干细胞 乙型肝炎 人类乙型肝炎 统计学分析 变化趋势 表达水平 基因表达 结果检测 数据支持 乙肝病毒 制备过程 作用机制 感染 给药 体外 研究 | ||
【说明书】：
本发明涉及一种南蛇藤提取物含药血清对HBV和MIF作用的研究方法。该南蛇藤提取物含药血清对HBV和MIF作用的研究方法按顺序包括：南蛇藤提取物含药血清的制备过程，人骨髓间充质干细胞分离、培养、纯化过程，乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞的过程，南蛇藤提取物含药血清处理感染了HBV的人骨髓间充质干细胞的过程，结果检测过程，统计学分析过程。本发明明确南蛇藤素对人类乙型肝炎的药用价值，为突破乙型肝炎奠定基础。明确给药后人BMSCs中HBsAg、HBeAg、HBcAg、MIF的量的变化趋势、HBVcccDNA的表达水平及MIF基因表达情况，为下一步探究南蛇藤素的作用机制提供数据支持。
技术领域
本发明涉及一种南蛇藤提取物的研究方法，具体为南蛇藤提取物含药血清对HBV和MIF作用的研究方法。
背景技术
乙型肝炎病毒，简称HBV,感染人体后导致乙型病毒性肝炎（hepatitis B），是我国传染病死亡的重要原因之一，常伴有肝硬化、肝癌等并发症，病死率高。研究认为，乙型病毒性肝炎与机体免疫应答异常、细胞因子网络活化密切相关。现阶段治疗多以药物抑制HBV的复制和数量的治疗方法为主。
巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）是一种重要的前炎症因子，主要作用为抑制巨噬细胞的游走移动，促进巨噬细胞在炎症局部浸润、聚集、增生、活化，增强其粘附、吞噬作用，还能促进多种炎症细胞因子的生成。MIF 的广泛参与炎症反应和肿瘤生成等，研究表明MIF在乙型肝炎发病机制中起重要作用。
南蛇藤素有抗发炎作用，早在清代吴其濬撰写的《植物名实图考》中，就有过“行血气。治无名肿毒”的记载。现研究表明，南蛇藤素在原代肝细胞水平能够抑制HBV-DNA 的复制，还可以有效地抑制HBsAg 的表达。
本实验通过南蛇藤提取物作用于感染了HBV 的人BMSCs，通过观察加入南蛇藤素前后MIF 表达能力的差异，探究南蛇藤素对乙肝治疗的作用。通过该实验，理论上能够进一步提高对南蛇藤素治疗价值的认识水平，为乙肝的相关影响因素提供新的实验依据，临床上能为乙肝的诊治提供新的治疗思路从而更好的辅助乙肝的治疗。
乙型肝炎病毒，缩写为HBV，是双链DNA 病毒1，属Orthohepadnavirus2，为Hepadnaviridae 病毒家族的成员。感染人体后导致乙型病毒性肝炎（hepatitis B），简称乙肝，是由乙型肝炎病毒感染后，引起的肝脏急性或慢性发炎之疾病。乙肝病毒传染途经为接触到受感染的体液，特别由血液感染占最大宗4。据估计，全球每三人当中，就会有一个人曾经被乙型肝炎病毒感染，而其中约有2.4亿至3.5亿人会转变成慢性肝炎。乙型肝炎与肺结核、血吸虫病和艾滋病并列为中国四大传染病。
南蛇藤素：南蛇藤素(celastrol) 为一种醌甲基化三萜化合物(quinonemethidetriterpene)7，其醌甲基化的结构可与半胱胺酸残基(residues) 的硫基反应，形成共价蛋白键结物，又称为雷公藤三萜醇或雷公藤红素，也是雷公藤根部的药理活性成份之一。南蛇藤素具有抗发炎、抗癌、缓解自体免疫疾病(如：类风湿性关节炎、全身性红斑性狼疮)、及调节蛋白质平衡(proteostasis) 疾病的作用9。现研究表明，南蛇藤素在原代肝细胞水平能
够抑制HBV-DNA 的复制，还可以有效地抑制HBsAg 的表达。
国内外研究现状，目前国内外对于HBV 的研究愈发深入，特别是对母婴传播的疫苗预防，已经成为每个国家计划免疫的基础与重点。但对于已发病患者，由于现阶段仍没有一种药物直接针对HBV 的cccDNA，易导致乙肝复发。目前仍无法有效治愈乙型肝炎。世卫组织建议使用替诺福韦或恩替卡韦进行口服治疗，是目前抑制乙型肝炎病毒的最有效药物。巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor MIF），也被称为糖基化抑制因子（GIF）。是在人中由MIF 基因编码的蛋白质10.11。MIF 是先天免疫的重要调
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- 本发明公开了一种自身炎症性单基因病检测引物组和方法，将254个自身炎症性单基因病突变位点的多重PCR扩增压缩至8个孔中进行，可以在可操作性、灵敏度、节省时间、降低成本方面解决现有技术的不足，具有操作简单、检测周期短、结果直观、准确性高、检测灵敏度高等技术优势。
- 一组用于代谢性脂肪肝介导的血管性疾病的诊断的生物标记物及其应用-201911179388.5
- 陈扬;张宜;商洪才;何蓉蓉;叶丽风;左睿 - 广州中医药大学(广州中医药研究院)
- 2019-11-27 - 2020-01-31 - C12Q1/6883
- 本发明提供了一组用于代谢性脂肪肝介导的血管性疾病诊断的标志物，所述标志物包括miR‑240、miR‑197、miR‑2125、miR‑923、miR‑1796、miR‑1367、miR‑1839，其核苷酸序列为：SEQ ID No.1～7所示。通过试验验证，该7种miRNA在正常小鼠与代谢性脂肪肝介导的血管性疾病小鼠的血液中差异性表达，因此，可将其作为代谢性脂肪肝介导的血管性疾病诊断和评估的分子标志物，还可用来作为预测或评估已经存在的心血管疾病的预后进行早期干预。
- 17种miRNA检测探针和试剂盒-201510430200.5
- 陈昌华;吴诗扬 - 益善生物技术股份有限公司
- 2015-07-21 - 2020-01-31 - C12Q1/6883
- 本发明涉及一种17种miRNA检测探针和包括上述检测探针的miRNA检测试剂盒，所述检测探针包括有杂交探针：其5'端为tag标签序列，3'端为结合序列，所述tag标签序列和所述结合序列之间还设有待检测靶标miRNA反向互补序列；所述tag标签序列选自SEQ ID NO.20—SEQ ID NO.38；所述待检测靶标miRNA反向互补序列选自SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.17；信号探针：其5'端为信号序列，3'端为polyT或oligoTGG。本发明所设计的各种检测探针，能够在均一的反应条件下进行杂交反应，且各种探针之间基本不存在非特异性结合，特异性好、信噪比高。
- 用于检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸、试剂盒及方法-201611054344.6
- 周艳琳;邹芳;段卫涛;赵平锋 - 武汉海吉力生物科技有限公司
- 2016-11-25 - 2020-01-31 - C12Q1/6883
- 本发明公开了本发明提供了一组用于快速检测AGTR1基因的A1166C多态性位点的核酸，同时建立了一种比较高效、灵敏的AGTR1基因的A1166C多态性位点的检测试剂盒及快速检测方法。其检测试剂盒，使用方便，操作简便，自动化程度高，大大简化了操作过程，并减少了在操作过程的污染，检测效果好，具有高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度的特点。提供的检测方法采用完全闭管操作，操作简单、方便快捷、通过直接探测PCR过程中荧光信号值的获得检测的结果，不需要PCR后处理或电泳检测，克服了常规PCR技术的易污染、出现假阳性，能有效避免非特异性扩增难题，并且适合大批量样本的检测。
- IVF-ET相关微小RNA及其应用-201810778390.3
- 张璇;杨菁;王健;兖娜娜;顾文文;孟楠;甄兴兴 - 上海市计划生育科学研究所;武汉大学人民医院
- 2018-07-16 - 2020-01-24 - C12Q1/6883
- 本发明提供了涉及IVF‑ET相关微小RNA及其应用。具体地，本发明提供了miRNA或其检测试剂的用途，用于制备判断体外受精‑胚胎移植(IVF‑ET，in vitro fertilization and embryo transfer)妊娠结局的试剂盒。本发明提供本领域急需能够用于IVF‑ET胚胎移植后早期妊娠结局的鉴别和预测的生物标志分子。
- 一种检测诊断多发性牛奶咖啡斑相关疾病致病基因的DNA文库及其应用-201911005321.X
- 王开宇;赵烨;陈志伟 - 福州福瑞医学检验实验室有限公司
- 2019-10-22 - 2020-01-24 - C12Q1/6883
- 本发明涉及一种检测诊断多发性牛奶咖啡斑相关疾病致病基因的DNA文库及其应用，该文库包括51个多发性牛奶咖啡斑相关疾病的致病基因。本发明优选51个多发性牛奶咖啡斑相关疾病致病基因，设计探针池，建立针对51个多发性牛奶咖啡斑致病基因的目标区域文库，文库利用高通量测序技术进行测序，寻找致病突变，为临床诊断提供遗传学和分子生物学依据，具有准确、快速、灵活、低成本的特点，本发明涉及的51个基因检测区域能够检测遗传性色素异常、Cowden综合征、共济失调性毛细血管扩张症、Noonan综合征等多种多发性牛奶咖啡斑相关疾病，对多发性牛奶咖啡斑的病因分析和鉴别诊断有着重要的意义和临床价值。
- 肝肺综合征筛查的长链非编码RNA及其应用-201911178446.2
- 杨从文;鲁开智;易斌;刘静 - 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院
- 2019-11-27 - 2020-01-24 - C12Q1/6883
- 本发明公开了肝肺综合征筛查的长链非编码RNA及其应用，长链非编码RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该lncRNA在HPS病人肝脏大量合成，并以外泌体的形式经血液，分泌到肺，诱导了肺部炎症，肺微血管新生，进而影响肺血管扩张，导致患者呼吸困难等典型的HPS症状。因此可通过检测患者血液外泌体中lncRNA的含量，用于临床上高效地筛选出HPS患者。
- 专利分类
