[发明专利]双特异性抗体的改进的组装

权利要求书

1.产生异源双特异性抗体的方法，所述方法包括：

a.获得IgG1同种型的第一半抗体，其中所述第一半抗体包含异二聚化结构域；

b.获得IgG1同种型的第二半抗体，其中所述第二半抗体包含异二聚化结构域；

c.调节各半抗体的pH至4和9之间；

d.混合所述第一和第二半抗体以获得组装混合物；

e.向所述组装混合物中加入以50-400X摩尔过量的谷胱甘肽(GSH)；和

f.孵育所述组装混合物来形成包含所述第一和第二半抗体的异源多聚体蛋白质，

其中所述半抗体包含Fc成分，并且其中所述第一半抗体包含杵并且所述第二半抗体包含臼。

2.权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二半抗体经蛋白A纯化。

3.权利要求1所述的方法，其中在步骤c中，所述第一和/或第二半抗体在加溶剂存在下调节至pH4-9，其中所述加溶剂是精氨酸或组氨酸。

4.权利要求1所述的方法，其中步骤c中每种半抗体的pH被调节至pH 5-8。

5.权利要求1所述的方法，其中在混合后调节pH。

6.权利要求4所述的方法，其进一步包括在15℃至39℃之间孵育所述组装混合物至少30分钟。

7.权利要求6所述的方法，其进一步包括在37℃的温度孵育所述组装混合物至少30分钟。

8.权利要求6或7所述的方法，其中所述组装混合物在pH8下孵育。

9.权利要求1所述的方法，其中所述步骤f中的组装混合物具有-200至-600mV之间的氧化电位。

10.权利要求9所述的方法，其中所述步骤f中的组装混合物具有-300至-500mV之间的氧化电位。

11.权利要求10所述的方法，其中所述步骤f中的组装混合物具有-400mV的氧化电位。

12.权利要求1、2、4、或6所述的方法，其中所述谷胱甘肽按50-200X摩尔过量加入到所述组装混合物中。

13.权利要求1、2、4、或6所述的方法，其中所述谷胱甘肽按100-300X摩尔过量加入到所述组装混合物中。

14.权利要求12所述的方法，其中在为精氨酸、组氨酸或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的稳定剂的存在下，在15℃至39℃之间孵育所述组装混合物。

15.权利要求14所述的方法，其中在为精氨酸、组氨酸或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的稳定剂的存在下，在37℃的温度孵育所述组装混合物。

16.权利要求14所述的方法，其中所述稳定剂是PVP，加入PVP至不超过40％(w/v)。

17.权利要求1、2、4、或6所述的方法，其中通过细菌细胞、酵母细胞、杆状病毒或哺乳动物细胞来产生所述半抗体。

18.权利要求17所述的方法，其中通过细菌细胞来产生所述半抗体。

19.权利要求18所述的方法，其中通过大肠杆菌细胞来产生所述半抗体。

20.权利要求1所述的方法，其中所述杵包含T366W取代，并且所述臼包含T366S，L368A和Y407V取代。