本发明涉及基因编辑技术领域,尤其涉及一种VI‑B型CRISPR/Cas13基因编辑系统及其应用。本发明的VI‑B型CRISPR/Cas13基因编辑系统包括Lt1Cas13b蛋白和CRISPR RNA;所述Lt1Cas13b蛋白为RNA核酸内切酶,所述Lt1Cas13b蛋白具有SEQ ID NO:1本发明挖掘出一种新的VI‑B型CRISPR/Cas13基因编辑系统,可广泛应用于需要识别、结合及编辑原核生物或真核生物RNA的场景中,为RNA编辑工具提供了新的应用选择。
本发明涉及一种Lt1Cas13d蛋白及基因编辑系统,其包含Lt1Cas13d蛋白或者编码所述Lt1Cas13d蛋白的一种或多种核苷酸序列,以及CRISPR RNA或转录所述CRISPR RNA的一种或多种核苷酸序列;其中,所述Lt1Cas13d蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,或与SEQ ID NO.1具有至少80%的同源性的序列。本发明找到一种新的RNA核酸内切酶即Lt1Cas13d蛋白,并使用其开发了VI‑D型CRISPR/Cas13基因编辑系统,该基因编辑系统应用于编辑原核生物或真核生物基因,为基因编辑工具箱提供了新选择。
本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段,所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77%同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别地,在升高的温度)进行遗传工程的新型工具。