本发明公开了一种重组人雌激素α受体配体结合域蛋白,以及该重组蛋白的制备方法和应用。该重组蛋白包括人雌激素α受体蛋白的第270位氨基酸残基至第554-595位中任一氨基酸残基的片段,以及连接于该片段N端的6×His标签和C端的Strep tag II标签,其在稳定性和与雌激素化合物的结合活性方面均优于已经报道过的同类蛋白且本发明的重组人雌激素α受体配体结合域蛋白带有双标签,便于纯化和后续应用。将该重组蛋白固定化于载体表面,制成雌激素受体亲和吸附剂,可用于环境雌激素污染物的选择性纯化和富集,为这类环境污染物的高通量检测提供了有力的手段。