本发明提供一种含有人PD1基因sgRNA的T细胞,所述sgRNA是敲除PD1基因的靶点;所述sgRNA的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8所示;将含有Crispr‑PD1‑T细胞;本发明所述含sgRNA的Crispr‑PD1‑T细胞对PD1基因的敲除率为58.26‑72.67%;对结肠癌细胞系LoVo和宫颈癌HELA细胞系表现出显著的特异性细胞毒性作用并呈现效靶比梯度依赖性即效靶比越高细胞毒性作用越强
所示,所述CLEC14A单链抗体的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示;本发明所述抗CLEC14A嵌合抗原受体修饰的T细胞,以表达人源化CLEC14A抗原的CHO细胞作为靶细胞进行体外杀伤试验,效靶比为1:1时,IFN‑γ的释放量为3100‑3110 pg/mL,效靶比为5:1时,IFN‑γ的释放量为6945‑6955 pg/mL,效靶比为10:1时,IFN‑γ的释放量为9300‑9310pg/mL,