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[发明专利]一种免疫细胞冻存液及其应用-CN202310536822.0在审
发明人：张孝松;俞英豪;彭昉;陈波 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-05-10 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种免疫细胞冻存液，其组分包括：二甲基亚砜0.01‑0.05mL/mL，葡萄糖0.1‑0.18g/mL，L‑岩藻糖0.02‑0.08mg/mL，氧化铁负载维生素C 1‑4mg/mL，聚甘油脂肪酸酯0.1‑0.6μg/mL，聚乙二醇0.01‑0.05mg/mL，非必需氨基酸5‑20mg/mL，人血白蛋白5‑25mg/mL。本发明还公开了一种免疫细胞冻存方法，将外周血单核细胞与上述免疫细胞冻存液混合均匀得到细胞悬浮液，移入无菌冻存管然后放入冻存盒中，程序降温至‑50～‑70℃，冻存5‑15h，然后转入液氮中冻存。本发明还公开了一种免疫细胞冻存复苏方法。
一种免疫细胞冻存液及其应用

[发明专利]一种人类活性免疫细胞冻存液及其冻存方法-CN202310526289.X在审
发明人：陈波;俞英豪;彭昉;张孝松 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-05-10 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种人类活性免疫细胞冻存液，其组分包括：聚乙二醇1‑2.5mg/ml，1,3‑丙二醇1‑3mg/ml，半乳糖胺0.01‑0.05mg/ml，唾液酸0.01‑0.05mg/ml，葡聚糖0.1‑0.3mg/ml，海藻糖0.1‑0.5mg/ml，苜蓿素0.1‑0.2mg/ml，壬基酚聚氧乙烯醚‑100.1‑0.4μg/ml，草酸钙0.01‑0.02mg/ml，壳聚糖0.1‑0.5mg/ml，非必须氨基酸5‑15mg/ml，人血白蛋白10‑20mg/ml；聚乙二醇相对分子质量为800‑1200。本发明还公开了一种人类活性免疫细胞的冻存方法。本发明还公开了一种人类活性免疫细胞的冻存复苏方法。
一种人类活性免疫细胞冻存液及其方法

[发明专利]一种细胞保存液及其应用和细胞保存方法-CN202310610214.X在审
发明人：彭昉;俞英豪;张孝松;陈波 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-05-25 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞保存液，其组分包括：乙二胺四乙酸二钠0.1‑1mg/mL，D‑甘露醇20‑26μg/mL，五羟黄酮10‑16μg/mL，L‑谷氨酰胺1‑3mg/mL，山柰素‑3‑鼠李葡糖苷0.2‑0.6mg/mL，木兰花碱1‑2mg/mL，羟乙基淀粉10‑14mg/mL，二硫苏糖醇0.01‑0.1mg/mL，氯化钠9mg/mL，人血清白蛋白0.5‑1.5mg/mL。本发明还公开了上述细胞保存液的应用。本发明还公开了一种细胞保存方法，将细胞悬浮于上述细胞保存液中得到细胞悬液；将细胞悬液分装在冻存管中，在温度为10‑15℃环境中保存。
一种细胞保存及其应用方法

[发明专利]一种用于肿瘤治疗的NK细胞培养方法-CN202310613980.1在审
发明人：张孝松;俞英豪;彭昉;陈波;洪茜茜 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-05-25 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于肿瘤治疗的NK细胞培养方法，包括如下步骤：(1)分离单个核细胞，将单个核细胞接种于NK细胞培养基中培养1‑3天，培养温度为35‑38℃，得到一次培养物；(2)向一次培养物中补加OK‑432、IL‑21和去乙酰毛花苷，继续培养1‑3天；(3)向二次培养物中IL‑2、IL‑15、IL‑21、亚叶酸、姜黄素，继续培养1‑3天。本发明创造性将去乙酰毛花苷添加至NK细胞培养过程中，发现其在避免培养过程中使用具有复杂成分动物血清的基础上，一方面降低给细胞培养带来的不安全因素，另一方面能促进NK细胞的活化和增殖。
一种用于肿瘤治疗 nk 细胞培养方法

[发明专利]一种体外高效扩增NK细胞的培养基和培养方法-CN202310526293.6在审
发明人：彭昉;俞英豪;张孝松;陈波 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-05-10 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外高效扩增NK细胞的培养基，包括：培养基A、培养基B和培养基C；培养基A的组分包括：RPMI‑1640培养基、重组人胰岛素、人血清白蛋白、胆固醇；培养基B的组分包括：GT‑T551培养基、苦瓜多肽、大豆异黄酮、谷氨酰胺、抗CD3抗体、维生素C；培养基C的组分包括：RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、人血清白蛋白、FK506、IL‑15、OK‑432、IL‑21。本发明还公开了一种体外高效扩增NK细胞的培养方法，(1)将单个核细胞接种于上述培养基A中培养；(2)将步骤(1)培养细胞接种于上述培养基B中培养；(3)将步骤(2)培养细胞接种于上述培养基C中培养。
一种体外高效扩增 nk 细胞培养基培养方法

[发明专利]一种淋巴细胞的扩增体系及扩增方法-CN202011538923.4有效
发明人：彭昉;俞英豪;王冶陶 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种淋巴细胞的扩增体系及扩增方法。该扩增体系包括组分1和组分2；组分1包括灭活的基因工程细胞1、胎牛血清IL‑2和淋巴细胞基础培养基；组分2为含灭活的基因工程细胞2的淋巴细胞基础培养基；基因工程细胞1为表达CD80、IL21、IL12的滋养细胞；基因工程细胞2为表达CD80、IL12的滋养细胞。本发明利用该扩增体系与NK细胞共培养，14天获得的NK细胞的存活率达92％，NK细胞扩增倍数约5000倍，达到各种临床适合治疗病症预期疗效应用要求；同时可以有效降低NK细胞的应用成本，为NK细胞过继免疫治疗的广谱应用奠定了基础。
一种淋巴细胞扩增体系方法

[发明专利]一种扩增激活NK细胞的培养基组合及其制备方法和应用-CN202310061378.1在审
发明人：王冶陶;彭昉;俞英豪 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-01-16 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： B07C5/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种扩增激活NK细胞的培养基组合及其制备方法和应用，所述培养基组合包括诱导培养基、扩增培养基和激活培养基；所述诱导培养基包括基础培养基和诱导组分、所述扩增培养基包括基础培养基和扩增组分、所述激活培养基包括基础培养基和激活组分；所述基础培养基含有血清。本发明所述培养基组合，既可以活化外周血单个核细胞中的多种免疫细胞，同时对纯化的NK细胞，也可以模拟抗原提呈细胞识别抗原后被活化的状态。三种培养基相辅相成，使得培养得到的NK细胞在扩增倍数、细胞纯度和对肿瘤细胞的杀伤活性等方面都优于现有技术，且与使用滋养层细胞体外扩增NK细胞相比，该培养基组合不使用外来肿瘤细胞，安全性比较好。
一种扩增激活 nk 细胞培养基组合及其制备方法应用

[发明专利]一种NKT细胞冻存液及NKT细胞的保存方法-CN202310038662.7在审
发明人：王冶陶;彭昉;俞英豪 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-01-13 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种NKT细胞冻存液及NKT细胞冻存液的保存方法，所述NKT细胞冻存液的组分包括：二甲基亚砜、人血白蛋白、右旋糖酐、海藻多糖、银耳多糖和生理盐水。本发明所涉及的NKT细胞冻存液通过在生理盐水中同时加入二甲基亚砜、人血白蛋白、右旋糖酐、海藻多糖、银耳多糖，获得的冻存液大大减少了细胞在冻存复苏过程中受到的伤害，能很好地增加NKT细胞的活率，细胞复苏后也有良好杀伤能力。
一种 nkt 细胞冻存液保存方法

[发明专利]一种增加NK细胞冻存复苏后活性的方法及其应用-CN202310038621.8在审
发明人：王冶陶;彭昉;俞英豪 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-01-13 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种增加NK细胞冻存复苏后活性的方法及其应用，所述方法包括：将待冻存的NK细胞于冻存前先与L‑脯氨酸和β‑巯基乙醇混合培养，然后再与NK细胞冻存液混合，得到细胞悬液，将细胞悬液置于无菌冻存管中，于液氮中冻存。本发明创造性地发现在冻存前的NK细胞培养阶段向培养体系中添加L‑脯氨酸和β‑巯基乙醇，能够使冻存复苏后仍保持较高的细胞存活率和杀伤能力。这种方法提供了一种冻存剂配方改良以外的NK细胞保存策略，可以减少冻存剂中二甲基亚砜等细胞保护剂的用量，使冻存液对冻存细胞和人体的毒性大大降低，以及降低成本。
一种增加 nk 细胞复苏活性方法及其应用

[发明专利]一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用-CN202310061239.9在审
发明人：王冶陶;彭昉;俞英豪 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-01-16 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C01B32/39 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用，所述NK细胞冻存液包括人血白蛋白、聚乙二醇、二甲基亚砜、右旋糖酐、维生素B12、氯化钠和水。本发明创造性地发现使用人血白蛋白、聚乙二醇、二甲基亚砜、右旋糖酐、维生素B12和氯化钠组成的NK细胞冻存液冻存细胞，可以提高细胞的存活率，减少NK细胞在冻存复苏过程中受到的伤害，且细胞复苏后具有良好增殖和杀伤能力。
一种 nk 细胞冻存液及其制备方法应用

[发明专利]一种组合物及其在扩增自然杀伤细胞中的应用-CN202310003802.7在审
发明人：王冶陶;彭昉;俞英豪 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种组合物及其在扩增自然杀伤细胞中的应用。所述组合物含有白介素21、白介素12A、白介素12B和CD80。本发明设计特定组分的组合物，利用白介素21、白介素12A、白介素12B和CD80协同配合，能够活化单核细胞中的多种免疫细胞，创造适合NK细胞生长的环境，有效激活扩增NK细胞，此外，配合白介素7和/或维生素C能够进一步促进NK细胞的激活和增殖，培养14天的扩增倍数高于3861倍，最高约6853倍，90％以上的淋巴细胞变成NK细胞。
一种组合及其扩增自然杀伤细胞中的应用

[发明专利]一种NK细胞的培养体系及培养方法-CN202011539113.0有效
发明人：俞英豪;彭昉;王冶陶 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种NK细胞的培养体系及培养方法。本发明提供的培养体系包括组分1和组分2；组分1包括NK细胞无血清培养基和灭活的基因工程细胞；组分2为NK细胞无血清培养基。利用本发明培养体系对NK细胞进行培养、扩增，14天可获得90％以上的效应细胞，扩增倍数约11000倍，为NK细胞过继免疫治疗的广谱应用奠定了基础。
一种 nk 细胞培养体系方法

[发明专利]基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用-CN202011538952.0有效
发明人：俞英豪;王冶陶;彭昉;蔡燕萍 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用。本发明利用异体原核生物作为滋养层细胞，通过基因工程手段获表达CD137L、IL21和CD4中至少一种蛋白的基因工程细菌，将该基因工程细菌表达用于扩增淋巴细胞，具有扩增效率高、安全性好的优点，且成本更低。实现结果表明，利用本发明基因工程细菌扩增纯化的NK细胞或未经纯化的淋巴细胞，NK细胞14天分别增长25892.99倍、30150.22倍。其中，对未经纯化的淋巴细胞进行培养，获得NK细胞的纯度达98.5％，显著优于传统因子培养以及现有滋养细胞技术的培养效果。
基因工程细菌及其淋巴细胞扩增中的应用

[发明专利]一种强杀伤性NK细胞的培养基及体外扩增方法-CN202210716228.5在审
发明人：俞英豪;王冶陶;彭昉;蔡燕萍 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种强杀伤性NK细胞培养基。本发明公开了一种强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，将PBMC细胞进行磁珠分选得到NK细胞；将NK细胞悬于上述强杀伤性NK细胞培养基中，然后转移至细胞培养瓶中；继续向细胞培养瓶中加入自体血浆及5‑15μg/mL抗Her‑2单克隆抗体、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mLIGF‑1等，然后将细胞培养瓶置于培养箱中培养；每隔3天补加上述强杀伤性NK细胞培养基、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mL重组人IL‑15、5‑15ng/mL重组人IL‑21，继续培养；培养14天后，从培养袋中取出细胞，获得强杀伤性NK细胞。
一种杀伤性 nk 细胞培养基体外扩增方法

[发明专利]一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法-CN202210716229.X在审
发明人：俞英豪;王冶陶;彭昉;叶志春 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种高纯度NK细胞体外扩增培养方法，包括如下步骤：向GT‑T551基础培养基中加入IL‑2、IL‑12、IL‑15、IL‑17、黄芩素、姜黄素、云芝多糖，得到NK细胞培养基；NK细胞培养基中，IL‑2的浓度为500‑600μg/mL，黄芩素的浓度为10‑20μg/mL，姜黄素的浓度为10‑20μg/mL，云芝多糖的浓度为15‑25μg/mL；采集并分离自体外周血的单个核细胞，加入至NK细胞培养基中重悬细胞，加入细胞培养瓶中，置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中孵育，每隔2天，补加含IL‑2的GT‑T551培养基，培养至第7天，扩瓶培养；培养至第14天，获得高纯度NK细胞。
一种纯度 nk 细胞体外扩增培养方法

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