本发明提供一种天冬氨酸激酶，所述天冬氨酸激酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第340位的氨基酸残基为非天冬氨酸。本发明的天冬氨酸激酶能高效解除L‑赖氨酸的反馈抑制，并且能有效用于生产L‑赖氨酸。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶的基因的宿主细胞以及利用所述宿主细胞或天冬氨酸激酶产生L‑赖氨酸的方法。本发明的天冬氨酸激酶或包含本发明天冬氨酸激酶的宿主细胞还用于产生L‑苏氨酸、L‑甲硫氨酸、L‑异亮氨酸或L‑缬氨酸。本发明还提供利用所述天冬氨酸激酶或宿主细胞产生L‑天冬氨酰‑4‑基磷酸的方法。
本发明提供一种天冬氨酸激酶，所述天冬氨酸激酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO2所示氨基酸序列的第340位的氨基酸残基为非天冬氨酸。本发明的天冬氨酸激酶能高效解除L‑赖氨酸的反馈抑制，并且能有效用于生产L‑赖氨酸。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶的基因的宿主细胞以及利用所述宿主细胞或天冬氨酸激酶产生L‑赖氨酸的方法。本发明的天冬氨酸激酶或包含本发明天冬氨酸激酶的宿主细胞还用于产生L‑苏氨酸、L‑甲硫氨酸、L‑异亮氨酸或L‑缬氨酸。本发明还提供利用所述天冬氨酸激酶或宿主细胞产生L‑天冬氨酰‑4‑基磷酸的方法。
本发明提供一种天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶及其编码基因，所述天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第253和/或406位的氨基酸残基发生突变。本发明的天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶能高效解除苏氨酸的反馈抑制，并且能有效用于生产L-苏氨酸。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶的基因的宿主细胞以及利用所述宿主细胞或天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶产生L-苏氨酸的方法。
本发明提供一种天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶及其编码基因，所述天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶的氨基酸序列在对应于SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的第432位、349位、410位、411位和/或356位的氨基酸残基发生突变本发明的天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶解除了苏氨酸的反馈抑制，有效用于生产高丝氨酸及其下游产物，例如L‑苏氨酸、L‑异亮氨酸、L‑蛋氨酸、O‑乙酰高丝氨酸或O‑琥珀酰高丝氨酸。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶基因的宿主细胞以及利用所述宿主细胞或天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶生产高丝氨酸及其下游产物的方法。
本公开涉及具有天冬氨酸激酶活性的多肽及其在生产氨基酸中的应用。具体来说，本公开涉及一种新的具有天冬氨酸激酶活性的多肽、重组多肽、多核苷酸、核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞，以及生产氨基酸的方法。本公开的具有天冬氨酸激酶活性的多肽是在在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第293、294和307位的一个或多个位置处发生突变的突变体，与SEQ ID NO：1所示序列的多肽相比，突变体多肽解除了赖氨酸对天冬氨酸激酶的反馈抑制，具有高的天冬氨酸激酶活性，能够用于赖氨酸及其衍生物的稳定、高效生产。
一种天冬氨酸激酶突变体、工程菌及该突变体的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明所述的高酶活天冬氨酸激酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的外源性天冬氨酸激酶经过2～10个、进一步2～6个、再进一步2～3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有天冬氨酸激酶的功能优选的是经过2个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，特别优选的，是对该氨基酸序列中第372位和379位的氨基酸进行定点饱和突变，并利用高通量筛选方法挑选高酶活天冬氨酸激酶突变体。本发明进一步利用电转化法将高酶活力且解除或削弱Lys反馈抑制作用的天冬氨酸激酶突变体的pEC‑AK重组穿梭表达载体转入到北京棒杆菌中，最终获得重组北京棒杆菌M372I‑T379S工程菌，并对其进行发酵产物分析
