一种天冬氨酸激酶突变体、工程菌及该突变体的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明所述的高酶活天冬氨酸激酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的外源性天冬氨酸激酶经过2～10个、进一步2～6个、再进一步2～3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且具有天冬氨酸激酶的功能。优选的是经过2个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，特别优选的，是对该氨基酸序列中第372位和379位的氨基酸进行定点饱和突变，并利用高通量筛选方法挑选高酶活天冬氨酸激酶突变体。本发明进一步利用电转化法将高酶活力且解除或削弱Lys反馈抑制作用的天冬氨酸激酶突变体的pEC‑AK重组穿梭表达载体转入到北京棒杆菌中，最终获得重组北京棒杆菌M372I‑T379S工程菌，并对其进行发酵产物分析。
