本发明公开了一种双羰基还原酶突变体及其应用。该双羰基还原酶突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO:9所编码的氨基酸序列发生突变的氨基酸序列,发生突变的氨基酸序列具有如下至少两个突变位点:第94位、第151位、第231位、第236位和第251位,且第94位的I突变为V、A或G;第151位的V突变为Q、N或S;第231位的F突变为W、Y或P;第236位的I突变为L、V或A;第251位的Q突变为H、R或K;或者双羰基还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点具有上述突变位点的双羰基还原酶突变体酶活性大幅度提高。