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[发明专利]一种大规模纯化质粒的方法-CN96195329.2无效
发明人： A·L·李;S·沙加尔 -专利权人：麦克公司
申请日： 1996-05-15 - 公布日： 1998-08-12 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：公开一种从大规模微生物发酵物中大规模分离和纯化质粒DNA的方法。应用公开的方法,能单独地分离到所有3种形态的质粒DNA;超螺旋(Ⅰ型)、带切口或松弛环状(Ⅱ型)和线性(Ⅲ型)。通过公开的方法提供了适于被包含在药用组合物中的高度纯化的DNA。
一种大规模纯化质粒方法

[发明专利]一种用于测序的高通量扩增质粒的方法-CN201410593687.4在审
发明人：董志;李桂澜 -专利权人：北京大学
申请日： 2014-10-29 - 公布日： 2015-02-04 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明一种用于测序的高通量扩增质粒的方法，属于质粒扩增技术领域。包括：将10×phi29 DNA聚合酶缓冲液、Hexamer引物、待测样品和去离子水混合均匀，在95℃加热3分钟，然后置于冰上冷却，得到反应液(Ⅰ)；在反应液(Ⅰ)中加入浓度为dNTP、100×BSA和phi29 DNA聚合酶，将其混合均匀，在30℃温育8小时，最后在65℃加热10分钟，得到反应液(Ⅱ)；将反应液(Ⅱ)用灭菌去离子水稀释3-6倍后，得到用于测序的DNA。本发明具有可以利用混合质粒库或单一质粒转化的大肠杆菌菌落作为模板，省去大量提取质粒的时间和人力消耗的优点。
一种用于通量扩增质粒方法

[发明专利]一种污泥中硝化杆菌属细菌的定量检测方法及应用-CN202111580698.5在审
发明人：陈刚新;卢紫欣;王国安;李魁晓;王佳伟;陈沉;张春蕊 -专利权人：北京城市排水集团有限责任公司
申请日： 2021-12-22 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：包括以下步骤：i)构建硝化杆菌属细菌DNA片段的质粒；ii)将质粒导入感受态细胞中，扩繁、质粒提取、梯度稀释，获得不同浓度的质粒；iii)从污泥中提取DNA；iv)得到不同浓度的质粒达到一定荧光强度分别对应的循环数和DNA对应的循环数；v)绘制标准曲线；vi)计算污泥中硝化杆菌属细菌的浓度。
一种污泥硝化杆菌细菌定量检测方法应用

[发明专利]工业化的基因合成方法-CN201110249829.1有效
发明人：柳伟强;杨平;刁文一;张万方;孙中平;廖国娟 -专利权人：苏州金唯智生物科技有限公司
申请日： 2011-08-29 - 公布日： 2012-01-18 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明揭示了一种工业化的基因合成方法，包括以下步骤：（1）将待合成的DNA序列进行分析和优化，得到目标DNA序列；（2）根据目标DNA序列，设计用于延伸的寡核苷酸链；（3）合成并纯化寡核苷酸链；（4）拼接寡核苷酸链，形成DNA片段；（5）将DNA片段克隆至载体得到重组体质粒；（6）对重组体质粒进行测序分析；（7）对测序正确的重组体质粒进行质量验证。
工业化基因合成方法

[发明专利]一种人类DNA STR检测用标准物质的制备方法-CN201110185834.0有效
发明人：毕万里;何召明;叶健;赵兴春 -专利权人：公安部物证鉴定中心;苏州新海生物科技有限公司
申请日： 2011-07-01 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种人类DNA STR检测用标准物质的制备方法，采用分子克隆技术制备人类DNA STR检测用标准物质。它的最大特点是将人工合成或PCR扩增获得的含有STR基因座的片段与质粒重组，将重组质粒转入细胞中，通过测序筛选出含有正确插入片段的克隆，并大量繁殖，提取重组质粒，通过酶切、纯化、混合制备出大量优质DNA本发明所述制备方法过程简单、成本低，本发明制备的DNA STR检测用标准物质具有良好的遗传稳定性，易于保存。
一种人类 dna str 检测标准物质制备方法

[发明专利]新型质粒及其利用-CN200480032427.4无效
发明人：山村荣虎;藤本升 -专利权人：第一精密化学股份有限公司
申请日： 2004-10-29 - 公布日： 2006-12-06 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明从来源于红球菌属菌的具有序列号73记录的碱基序列的质粒和具有序列号74记录的碱基序列的质粒或其DNA片段等，制备在红球菌属菌内可复制的DNA区域，从来源于大肠杆菌的质粒或其DNA片段，制备在大肠杆菌内可复制的DNA区域，制作穿梭载体。
新型质粒及其利用

[发明专利]一种质粒DNA的制备方法-CN201410435796.3在审
发明人：刘铮 -专利权人：刘铮
申请日： 2014-08-31 - 公布日： 2016-03-02 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：一种质粒DNA的制备方法属于DNA的制备方法技术领域，尤其涉及一种质粒DNA的制备方法。本发明提供一种纯度高的质粒DNA的制备方法。本发明包括以下步骤。1)挑取含有质粒的单菌落接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养过夜.取过夜培养的菌液,接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养；2)转移菌液至离心瓶中,离心,去上清；3)将细菌沉淀重悬溶液Ⅰ中，剧烈振荡
一种质粒 dna 制备方法

[发明专利]适用于H7N9禽流感病毒实时荧光定量PCR检测的质粒标准物质-CN201610522919.6在审
发明人：许丽;刘刚;梁文;李妍;李兰英;闻艳丽 -专利权人：上海市计量测试技术研究院
申请日： 2016-07-05 - 公布日： 2018-01-16 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种适用于H7N9禽流感病毒实时荧光定量PCR检测的质粒DNA标准物质，所述质粒DNA标准物质包含检测序列，所述检测序列的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述质粒DNA标准物质的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。该质粒DNA标准物质具有均匀性强，稳定性高的优点，同时解决了H7N9禽流感病毒实时荧光PCR检测中标准物质缺乏的难题，保证H7N9禽流感病毒实时荧光PCR方法检测结果的可比性，为H7N9禽流感病毒实时荧光
适用于 h7n9 禽流感病毒实时荧光定量 pcr 检测质粒标准物质

[发明专利]一种从细菌中提取质粒DNA的方法-CN202111174752.6在审
发明人：吴宗圣;杨鸿凯;何悦;张璐楠;程鑫;俞庆龄;董爱华 -专利权人：艾棣维欣（苏州）生物制药有限公司
申请日： 2021-10-09 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种从细菌中提取质粒DNA的方法，包括以下步骤：1)将发酵后的含有质粒DNA的大肠杆菌菌液加入裂解液裂解，得到裂解后的大肠杆菌菌液；2)将裂解后的大肠杆菌菌液与中和液混合得到混合液，再将所述混合液通入气泡发生装置中，并在沿所述气泡发生装置的水平延伸方向流过的过程中，通过第一气泡发生组件混匀反应25～120s，并将所述混合液中的渣体和反应液分层，排渣后，得到反应液；3)将所述反应液进行分离过滤、纯化，得到质粒DNA从而能够从细菌中大规模连续地提取质粒DNA，满足了核酸疫苗研发和后期产品大规模生产的需要。
一种细菌提取质粒 dna 方法

[发明专利]用于关节软骨缺损修复的mRNA剂型生物制剂及其制备方法和应用-CN202211623489.9在审
发明人：余新宁;戴雪松;潘宗友;朱苏南;齐义营;徐腾靖;王佳杰;林耘霆;汪斯衡;方晶华;徐凯望;宋红云;周祝兴 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-12-16 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： A61K9/00 文献下载
摘要：制剂包括活性成分mRNA，如SEQ ID NO：1所示或者相似度达90％以上的序列；方法包括合成DNA片段，将DNA片段克隆至表达质粒获得重组质粒，将重组质粒转入宿主细胞获得重组细胞，从重组细胞中提取质粒，PCR扩增获得DNA模板，利用DNA模板构建RNA体外合成体系并进行RNA体外合成获得活性成分mRNA；在用于软骨修复的制药中的应用。
用于关节软骨缺损修复 mrna 剂型生物制剂及其制备方法应用

[发明专利]混合装置和方法以及重组大肠杆菌质粒提取方法-CN202110699545.6有效
发明人：孙祥明;孔迪;滕小锘;肖龙会;冯证义 -专利权人：苏州沃美生物有限公司
申请日： 2021-06-23 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： B01F25/421 文献下载
摘要：本发明公开了一种混合装置、混合方法以及质粒的提取方法。混合装置包括用于容纳混合料的混合腔、以及设于该混合腔内并且使混合料在混合时产生自驱动湍流的紊流器。本发明特别适用于重组大肠杆菌中质粒DNA的提取，其能够避免重组大肠杆菌基因组DNA污染质粒DNA的现象，从而保证质粒DNA在提取后的纯度。
混合装置方法以及重组大肠杆菌质粒提取

[发明专利]一种提高质粒DNA在大肠杆菌工程菌中比含量的培养基-CN200910213725.8无效
发明人：丘力功;韦剑;赵亮;蔡小杰;王灿顶 -专利权人：广州拜迪生物医药有限公司
申请日： 2009-12-02 - 公布日： 2010-07-07 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明一种提高质粒DNA在大肠杆菌工程菌中比含量的培养基属于生物领域，本发明的培养基每升包含有下列配比组分：酵母提取物5.00g/L，甘油7.75ml/L，硫酸铵3.0g/L，磷酸氢二钠6.0g/L，磷酸二氢钾本发明的培养基能显著提高质粒DNA比含量水平，从而有利于下游质粒DNA纯化，提高大肠杆菌工程菌在增殖生长过程中质粒DNA的合成效率，可减少试剂的消耗，节约成本。
一种提高质粒 dna 大肠杆菌工程含量培养基

[发明专利]含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒、含该表达盒的微环DNA及应用-CN201310339305.0在审
发明人：陈志英;马飞;何成宜 -专利权人：深圳先进技术研究院;深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-08-06 - 公布日： 2015-02-11 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒及其制备方法，该微环DNA重组母质粒能在宿主菌内完成位点特异性重组，消除原核质粒元件，形成含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA；本发明还提供了一种含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA及其制备方法和应用，该微环DNA可在宿主细胞内稳定、持久地表达基因工程抗体基因，是一种高效、安全的基因治疗载体；其次，本发明还提供了一种含有该微环DNA的宿主细胞及其制备方法和应用；此外，本发明还提供了一种基因工程抗体及其制备方法和应用
基因工程抗体基因表达 dna 重组质粒应用

[发明专利]含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA重组母质粒、含该表达盒的微环DNA及应用-CN201310503003.2在审
发明人：陈志英;马飞;何成宜 -专利权人：深圳先进技术研究院;深圳市合一康生物科技有限公司
申请日： 2013-10-23 - 公布日： 2015-04-29 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA重组母质粒及其制备方法，该微环DNA重组母质粒能在宿主菌内完成位点特异性重组，消除原核质粒元件，形成含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA；本发明还提供了一种含重组嵌合抗原受体基因表达盒的微环DNA及其制备方法和应用，该微环DNA可在宿主细胞内稳定、持久地表达重组嵌合抗原受体基因，是一种高效、安全的基因治疗载体；其次，本发明还提供了一种含有该微环DNA的宿主细胞及其制备方法和应用；此外，本发明还提供了一种重组嵌合抗原受体及其制备方法和应用
重组嵌合抗原受体基因表达 dna 质粒应用

[发明专利]一种获得线性质粒DNA断裂位置序列信息的方法-CN202010402432.0有效
发明人：朱斌;成锐 -专利权人：华中科技大学;深圳华中科技大学研究院
申请日： 2020-05-13 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得线性质粒DNA断裂位置序列信息的方法，涉及分子生物学技术领域，包括以下步骤：S1.对已知序列的DNA片段进行磷酸化处理；S2.对待检测的线性质粒进行末端平齐化和磷酸化处理；S3.将DNA片段和线性质粒进行平端连接并转化到宿主菌中；S4.筛选阳性重组子，利用测序引物分别向连接位点方向进行测序，根据已知序列与紧邻的质粒序列得出线性质粒的断裂位置与断裂方式；所述测序引物为连接产物上的任一段序列本发明根据衔接位置的序列信息，可以准确得出线性质粒的断裂位置以及断裂位置附近的DNA序列信息，用于未知核酸酶的识别位点测定，具有操作简单快速、结果准确、成本低、耗时短等优点。
一种获得线性质粒 dna 断裂位置序列信息方法