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[发明专利]细胞内制备单链DNA-CN02828039.3无效
发明人：彼得·M·格拉泽 -专利权人：耶鲁大学
申请日： 2002-12-13 - 公布日： 2005-05-25 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明提供细胞内产生单链DNA分子的方法，该DNA分子在介导三链体依赖性或非依赖性染色体事件中具有活性。该方法所依据的发现即是将病毒载体或质粒导入细胞，它们在被改造的细胞内生成单链DNA分子，该DNA分子结合于目标染色体DNA从而形成三链体，该三链体可以诱导所需要的突变和/或进行基因重组并通过掺入供体DNA分子诱导染色体DNA的改变。上述载体或质粒不仅可编码TFO和任意供体DNA，而且可编码一种逆转录酶和任选一种限制酶，这在优选实施例中呈现为一种融合蛋白，逆转录上述载体或质粒编码的RNA，接着在一个限制酶切位点切割产生单链DNA。该单链DNA可以被直接生成或最初作为双链茎－单链环结构，然后被切割生成单链DNA。
细胞内制备 dna

[发明专利]一种提取金黄色葡萄球菌质粒的方法-CN201910153632.4在审
发明人：闫鹤;万锈琳 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2019-02-28 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种提取金黄色葡萄球菌质粒的方法。该方法包括如下步骤：先用裂解细菌菌体的试剂、溶菌酶和葡萄球菌酶裂解细菌菌体，并采用玻璃粉进行物理破壁，使金黄色葡萄球菌菌体充分裂解，得到菌体裂解液；然后向所述菌体裂解液中加入用于沉淀蛋白质和基因组DNA的试剂，得到含有蛋白质沉淀和基因组DNA沉淀的混合液；高速离心分离，取上清液转移至吸附柱中，进行吸附离心，富集质粒DNA；加入漂洗液进行脱盐离心，加入超纯水洗脱离心，得到质粒DNA。本发明的方法同时采用物理和化学方法提高了金黄色葡萄球菌的破壁效率，节约成本，提高了质粒提取过程中质粒的回收率。
金黄色葡萄球菌质粒菌体裂解液基因组DNA 细菌菌体质粒DNA 裂解葡萄球菌高速离心分离沉淀蛋白质蛋白质沉淀取上清液物理破壁质粒提取玻璃粉超纯水沉淀的混合液酶裂解漂洗液溶菌酶吸附柱富集菌体破壁脱盐吸附洗脱回收率节约

[发明专利]一种鲈鱼诺卡氏菌疫苗及其制备方法与应用-CN202310020564.0在审
发明人：王文博;焦铁军;金湛林;张中雨;卢静;马瑞;孟强;蔡畅敏 -专利权人：深圳万可森生物科技有限公司
申请日： 2023-01-06 - 公布日： 2023-06-09 - 主分类号： A61K39/05 文献下载
摘要：所述鲈鱼诺卡氏菌疫苗以鰤诺卡氏菌膜蛋白上的ABC家族的ATP结合蛋白(ABP)作为候选抗原，根据ABP的基因序列设计引物，克隆到载体中，获得重组质粒制备得到。培养ABP含原核表达重组质粒的工程菌种，发酵、破碎、纯化获得重组蛋白疫苗；培养ABP含真核表达重组质粒的工程菌种，大量提取去内毒素的重组质粒获得DNA疫苗；将甘露糖化壳聚糖包裹的真核重组质粒作为靶向DNA本发明制备的重组蛋白疫苗、DNA疫苗和靶向DNA疫苗对鲈鱼诺卡氏菌病均有较好的防治效果。
一种鲈鱼诺卡氏菌疫苗及其制备方法应用

[发明专利]一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法-CN201811427952.6有效
发明人：郭潇;王天云;窦媛媛;杨献军;王建华 -专利权人：河南普诺易生物制品研究院有限公司;新乡医学院
申请日： 2018-11-27 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法，属于生物技术领域。本发明提取质粒DNA的菌体裂解液由裂解缓冲液、溶菌酶、RNase A组成，裂解缓冲液的组成为：每100mL裂解缓冲液中含有1.5～10g蔗糖、0.7～2.2g乙二胺四乙酸二钠、0.3～0.9g三(羟甲基本发明提取质粒DNA的试剂盒，包括上述菌体裂解液、漂洗液和洗脱液。该试剂盒成本低、提取质粒纯度高、适用性好。
一种提取质粒 dna 菌体裂解试剂盒方法

[发明专利]一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA-CN202011466713.9有效
发明人：郭土敬;郭采平;王雪云;吴彦萍;梁富;黄致翔;吴灼斌;徐尔赞;叶才文;刘爱和 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2020-12-14 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA，所述纯化方法包括以下步骤：在质粒DNA超滤浓缩液中加入辛酸钠，混匀后，常温放置一段时间，接着低温静置一定时间，然后澄清处理；然后依次进行离子交换层析本发明在低温条件下，将辛酸钠应用于质粒DNA产品的纯化，不仅操作简便易放大，减少了操作步骤，同时提高了纯化质粒的总回收率，并符合药用标准；而且大大减少了硫酸铵的使用，降低了对操作人员和环境的影响。
一种质粒 dna 产业化纯化方法

[发明专利]针对多种登革病毒亚型的新疫苗-CN201910229555.6在审
发明人：大卫·韦纳;严健;尼兰詹·萨尔德赛 -专利权人：宾夕法尼亚大学理事会;艾诺奥医药品有限公司
申请日： 2014-03-14 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C12N15/40 文献下载
摘要：另外，存在能够在哺乳动物中产生针对多种登革病毒亚型的免疫反应的DNA质粒疫苗和使用它们的方法，所述DNA质粒疫苗包含DNA质粒和药学上可接受的赋形剂。所述DNA质粒能够在所述哺乳动物的细胞中以有效引发所述哺乳动物的免疫反应的量表达共有登革抗原，所述免疫反应针对所有4种登革亚型是交叉反应性的。
登革病毒亚型哺乳动物新疫苗多肽核酸构建体交叉反应性赋形剂可接受抗原亚型细胞

[发明专利]质粒DNA的纯化方法-CN200680003564.4有效
发明人： D·B·博伊德;A·J·克里斯托佩特;R·J·兰德;J·C·墨菲;M·A·温特斯 -专利权人：默克公司
申请日： 2006-01-27 - 公布日： 2008-11-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：公开从生产过程，包括大规模发酵方案中，来分离临床级质粒DNA的方法，所述方法包括了两个可供选择的均为质粒DNA纯化工艺中的核心单元操作。在此公开的新型上游和下游纯化工艺可降低产品成本并提高工艺稳定性。在此公开的纯化工艺中，任何一种或两种全部都可以与另外的本领域已知的与DNA质粒纯化技术相关的纯化步骤结合使用。
质粒 dna 纯化方法

[发明专利]一种内皮化生物心脏瓣膜及其制备方法-CN202010040644.9有效
发明人：雷洋;王云兵;邓璐;王刚 -专利权人：四川大学
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种内皮化生物材料及其制备方法，制备方法为：先扩增含有VEGF的质粒；然后提取VEGF质粒的DNA；再将提取的质粒DNA转染内皮细胞；然后将转染后的细胞与凝胶基质混合，并用混合物包覆生物材料本发明提供的方法通过将包裹VEGF质粒DNA的水凝胶制作成心脏瓣膜材料，能够提升生物材料的内皮化，进而减少钙化，心脏瓣膜的使用寿命延长。
一种内皮化生心脏瓣膜及其制备方法

[发明专利]SYBR Green 荧光染料DNA定量检测方法和试剂盒-CN201210540389.X在审
发明人：王泽广;吴立娟;董杰 -专利权人：王泽广
申请日： 2012-12-13 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及DNA定量检测方法和检测试剂盒。本发明建立了SYBR Green I荧光染料法对DNA定量的条件，得到了该方法的线性范围和灵敏度，可以快速、准确的得到DNA样品的精确含量。本发明还构建制备了质粒分子和基因组DNA标准品，采用数码PCR法对两种DNA标准品进行准确定量，利用该标准质粒或基因组DNA进行梯度稀释，得到SYBR Green I荧光染料法定量DNA的标准曲线，根据标准曲线得到待测DNA样品的准确含量。
sybr green 荧光染料 dna 定量检测方法试剂盒

[发明专利]在噬菌体中产生重组基因-CN200580029734.1无效
发明人：亚历山德罗·卢克;海克·斯特罗贝尔;简·T·马丁索恩;玛丽－阿格尼斯·珀蒂;米罗斯拉夫·雷德曼 -专利权人：麦克西斯法国股份有限公司
申请日： 2005-07-06 - 公布日： 2008-06-18 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及在噬菌体或包含噬菌体序列的质粒中制备和检测重组DNA序列的体内方法，利用噬菌体和含有噬菌体序列的质粒制备杂合基因和由这些杂合基因编码的杂合蛋白的方法，可用于这些方法的噬菌体和质粒，包含合适的细菌宿主细胞和噬菌体或质粒的试剂盒与这些方法相关的DNA序列包括蛋白质编码序列和非编码序列。
噬菌体产生重组基因

[发明专利]定量检测硫酸盐还原菌的方法及专用引物-CN201910203424.0在审
发明人：张世仑;王大威;靖波;张健;王秀军;景宏;马挺 -专利权人：中国海洋石油集团有限公司;中海油研究总院有限责任公司
申请日： 2019-03-18 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供的方法，包括如下步骤：1)、提取待测样品中细菌的基因组DNA和获得不同质粒DNA拷贝数的标准品溶液；2)、用成套引物分别对稀释后不同质粒DNA拷贝数的标准品溶液和待测样品中细菌的基因组DNA进行PCR扩增，再以稀释后标准品溶液的不同质粒DNA拷贝数的对数值为横坐标，不同质粒DNA拷贝数的标准品溶液的荧光定量PCR扩增反应初始循环数为纵坐标，建立标准曲线；计算待测样品中异化型亚硫酸盐还原酶基因拷贝数
标准品溶液待测样品质粒DNA 拷贝数硫酸盐还原菌基因组DNA 定量检测专用引物稀释细菌异化型亚硫酸盐还原酶荧光定量PCR 基因拷贝数检测硫酸盐标准曲线成套引物初始循环可重复性扩增反应特异性强还原菌灵敏度种检测广谱

[发明专利]一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法-CN202110722204.6有效
发明人：王栋;钟亚平;鲁振坦 -专利权人：武汉纺织大学
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒及提取方法。所述试剂盒包括用于裂解细菌的裂解试剂组和用于提取质粒DNA的提取试剂组；所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成。本发明提供的基于该试剂盒实现质粒DNA快速提取方法中，通过选用表面修饰有硅羟基或硅羧基的磁珠、0.15～0.45M的乙酸钠、1～3wt％的二硫苏糖醇和3～5M的异硫氰酸胍的混合液作为磁珠结合液复合体系，极大增强了质粒DNA和磁珠的结合能力，使得提取效率提高，提取速度加快，磁珠对DNA的吸附过程只需要1分钟，且提取出的DNA纯度高、片段完整；同时试剂均无毒性，对环境污染小，可用于替代市面上大部分同类产品
一种磁珠法快速提取细菌质粒 dna 试剂盒方法

[发明专利]参与精子转染外源DNA的基因筛选方法-CN201510035764.9在审
发明人：赵永聚 -专利权人：赵永聚
申请日： 2015-01-23 - 公布日： 2015-04-29 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：参与精子转染外源DNA的基因筛选方法，它涉及一种参与精子转染外源DNA的基因筛选方法。本发明的目的是提供一种筛选参与精子转染外源DNA基因的方法。方法：一、构建重组质粒pGB-mCD4；二、cDNA文库筛选获得待测基因；三、待测基因阳性克隆抽提酵母质粒并扩增；四、质粒pGB-mCD4与待测基因阳性克隆酵母质粒共转入酵母双杂交菌株Y190；五、进行β-galactosidase显色反应，显色结果变蓝的为阳性，分析，获得参与精子转染外源DNA的基因。通过本发明的方法能够大量、快速的获得与CD4共同作用转运外源DNA的基因，为精子介导基因转移机理的研究开辟新的思路，最终为建立简单、稳定、高效的精子介导转基因方法学奠定基础。
参与精子转染 dna 基因筛选方法

[发明专利]一种水稻育种方法-CN201610303747.3在审
发明人：何懿 -专利权人：广西兆和种业有限公司
申请日： 2016-05-10 - 公布日： 2016-09-28 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种水稻育种方法，包括如下步骤：用限制性内切酶酶切野生菰DNA、含有OsMADS57蛋白的编码基因和OsABC1‑2基因的DNA后，用冷乙醇‑40℃下过夜，离心，连接到pBin438质粒上构建外源质粒DNA；将所得外源质粒DNA重悬于质粒DNA保护剂中，得混合液；取表达纯化后的农杆菌毒蛋白VirD1、VirD2或VirE2溶液，依次加入所得混合液、脂质体混合后，加入缓冲液中，4℃放置2小时后，取出，
一种水稻育种方法

[发明专利]一种样本稀释倍数定量方法及其应用-CN202310935498.X在审
发明人：侯军艳;张亚晰;熊春福;陈维之;杜波 -专利权人：臻和（北京）生物科技有限公司
申请日： 2023-07-28 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开一种样本稀释倍数定量方法及其应用，将外源重组质粒引入原始肿瘤细胞系DNA样本，得到含外源重组质粒的原始肿瘤细胞系DNA样本；所述原始肿瘤细胞系DNA样本为将肿瘤细胞系DNA样本利用与肿瘤细胞系DNA配对的正常细胞系DNA样本稀释至ctDNA丰度达到预设值的样本；利用正常细胞系DNA样本对含外源重组质粒的肿瘤细胞系DNA样本进行梯度稀释；选取管家基因作为内参基因，对各梯度样本中的非人源基因片段和管家基因的拷贝数进行定量
一种样本稀释倍数定量方法及其应用