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[发明专利]四价流感病毒料液制备方法、四价流感病毒裂解疫苗及其制备方法-CN202310561966.1有效
发明人：罗姗;刘依润;徐江波;王雪云;郭土敬;王义民;刘栩祥;梁琳琳;刘永娣;赖婵丹 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2023-05-18 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种四价流感病毒料液制备方法、四价流感病毒裂解疫苗及其制备方法。四价流感病毒料液制备方法包括以下步骤：根据不同亚型的流感病毒选用不同品种的鸡胚，采用不同病毒稀释液稀释病毒后选择不同接种量接种至鸡胚尿囊腔；依次采用低温、高温进行病毒培养，然后采用冷冻再冷藏的冷胚步骤。本发明有效解决传统鸡胚法中鸡群对四型流感病毒的敏感性不一致，且流感病毒在鸡胚上复制效果差别大，收获时常规冷胚工艺时间长，病毒料液中的杂质多，造成的批间差异大，不利于后续纯化的缺点。
流感病毒制备方法裂解疫苗及其

[发明专利]一种流感病毒裂解疫苗原液的制备方法-CN202310283809.9有效
发明人： 郭土敬;王雪云;罗姗;徐江波;梁琳琳;刘永娣;刘依润;赖婵丹;周珊玄 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2023-03-22 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种流感病毒裂解疫苗原液的制备方法，包括以下步骤：S1：在鸡胚尿囊收获液中调节收获液的pH为5.5‑6.5；低温孵育后，加入助滤剂，搅拌均匀；过滤，收集滤过液并调节滤液pH至7.0‑8.0，放置于室温搅拌后，浓缩及洗滤，得到浓缩液；S2：浓缩液经超速离心纯化，经超滤洗滤多倍后，除去蔗糖，得到粗纯的病毒液；S3：在粗纯的病毒液中按比例加入灭活剂后，进行分子筛层析，即获得精纯的病毒液；S4：在精纯的病毒液中加入裂解剂裂解处理，在超滤洗滤去除裂解剂并进一步浓缩后，即得到流感病毒裂解疫苗原液。本发明的制备方法解决了流感病毒疫苗原液制备过程中总体回收率过低、杂蛋白透过率低、病毒纯度差的问题。
一种流感病毒裂解疫苗原液制备方法

[发明专利]一种流感病毒疫苗血凝素含量测定方法及试剂盒-CN202310291565.9有效
发明人：梁琳琳;王雪云;李慧;刘栩祥;郭土敬;罗姗;徐江波;曹静;刘永娣;张运佳;郭采平;赖婵丹;周珊玄 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2023-03-23 - 公布日： 2023-06-16 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明公开了一种流感病毒疫苗血凝素含量测定方法及试剂盒。所述测定方法分别包被标准抗原/供试品到空白酶标板上，经过封闭后再加入抗血清反应，去掉未结合的抗血清后加入通用酶标抗体，去掉未结合的酶标抗体后显色、终止，设置酶标仪双波长（450nm/630nm）进行测定。以标准抗原血凝素浓度的对数值和对应吸光度450/630nm的对数值作直线回归，将供试品吸光度450/630nm的对数值代入曲线，得出供试品的血凝素含量。所述方法具有高灵敏度、高检测通量、耗时短、检测步骤简单、抗原血清消耗少的优点，可以检测任何亚型的血凝素，适用范围大。利用该方法的试剂盒包括包被液、PBST、封闭液、通用酶标抗体、抗体稀释液、显色液、终止液。
一种流感病毒疫苗血凝素含量测定方法试剂盒

[发明专利]一种大肠杆菌表达蛋白及其表达纯化方法-CN202211064274.8在审
发明人：王雪云;何智敏;吴灼斌;郭土敬;梁富;黄致翔;李慧;刘栩祥;周维;周珊玄;罗姗;郭采平 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2022-08-31 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达蛋白及其表达纯化方法。该方法包括以下步骤：(1)L‑阿拉伯糖诱导大肠杆菌蛋白表达，其中，在诱导表达阶段，用果糖、麦芽糖和甘油作为碳源；(2)收获菌体洗涤与匀质破碎；(3)表达蛋白的粗提取；(4)三步法柱层纯化蛋白，在阳离子交换层析纯化中引入表面活性剂TritonX‑114。本发明中，L‑阿拉伯糖诱导阶段，用果糖和麦芽糖等碳源替代葡萄糖，可以提高蛋白表达效率，L‑阿拉伯糖对于后期蛋白产品的安全性高于传统的IPTG；连续发酵连续收获的发酵方法，提高了最终收获的菌体量和产物量；采取超滤法粗提蛋白产物，有效缓解多次离心所带来的污染风险，柱层纯化引入表面活性剂Triton X‑114，可以提高蛋白纯度且有效降低内毒素含量。
一种大肠杆菌表达蛋白及其纯化方法

[发明专利]一种质粒DNA原液制备方法-CN202110925806.1有效
发明人：王雪云;郭土敬;吴彦萍;吴灼斌;梁富;黄致翔;叶才文;刘爱和;曹静;梁琳琳;郭采平 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2021-08-12 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒DNA原液制备方法，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤，再浓缩至合适浓度。本发明的质粒DNA原液制备方法通过控制温度条件，并同时采用质粒DNA低浓度预浓缩及通过含多元醇的洗滤缓冲液进行洗滤，可有效减少质粒DNA的聚集沉淀及机械损伤，显著提高了质粒DNA的超滤回收率，回收率可高达85％以上。
一种质粒 dna 原液制备方法

[发明专利]一种靶向EGFR二聚化界面的单链抗体及其应用-CN201810872308.3有效
发明人：赵林;李黄金;蔡金艳;郭土敬 -专利权人：广东药科大学
申请日： 2018-08-02 - 公布日： 2021-08-03 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶向EGFR二聚化界面的单链抗体及其应用。所述融合蛋白含有从5’到3’依次连接的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的重链可变区蛋白、连接肽、氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的轻链可变区蛋白的氨基酸序列。本发明构建并优化了靶向EGFR二聚化界面的单链抗体的基因及毕赤酵母工程菌，通过发酵及分离纯化获得了该单链抗体，即通过基因工程技术成功高效地制备了靶向EGFR二聚化界面的单链抗体，该抗体，相对分子质量较小，穿透性好，在对实体瘤治疗中，抑瘤效果大大提高，能有效抑制EGFR异常表达肿瘤细胞的增殖生长，这将为后续EGFR新型抑制剂的开发打下基础，有巨大的应用价值。
一种靶向 egfr 二聚化界面抗体及其应用

[发明专利]一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法-CN202110411127.2在审
发明人： 郭土敬;王雪云;李慧;梁富;叶才文;黄致翔;王义民;梁琳琳;曹静;刘永娣 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2021-04-16 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： A61K39/205 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白的方法，包括：将收获的病毒鸡胚细胞培养上清过滤并浓缩处理后，采用含氯化钠以及精氨酸的磷酸缓冲液洗滤并加入β‑丙内酯进行灭活水解，再加入人血清白蛋白并低温静置后，进行超声以及纯化，即得已去除鸡胚宿主蛋白的狂犬病疫苗制品纯化液。本发明的方法中，加入人血白蛋白，可有效减少超声波对病毒颗粒的影响；进一步降低了产品中杂蛋白的含量；通过超声波清洗机对灭活水解液进行超声处理，洁净度要求及操作难度低，稳定性高。
一种用于去除狂犬病疫苗制品中鸡胚宿主蛋白方法

[发明专利]一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA-CN202011466713.9有效
发明人： 郭土敬;郭采平;王雪云;吴彦萍;梁富;黄致翔;吴灼斌;徐尔赞;叶才文;刘爱和 -专利权人：深圳市卫光生物制品股份有限公司
申请日： 2020-12-14 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种质粒DNA的产业化纯化方法及质粒DNA，所述纯化方法包括以下步骤：在质粒DNA超滤浓缩液中加入辛酸钠，混匀后，常温放置一段时间，接着低温静置一定时间，然后澄清处理；然后依次进行离子交换层析、疏水层析、超滤除盐浓缩和过滤除菌，完成纯化。本发明在低温条件下，将辛酸钠应用于质粒DNA产品的纯化，不仅操作简便易放大，减少了操作步骤，同时提高了纯化质粒的总回收率，并符合药用标准；而且大大减少了硫酸铵的使用，降低了对操作人员和环境的影响。本发明纯化方法纯化效果好而且纯化过程大大减少了硫酸铵试剂的使用，重复性强，操作简单，可满足工业产业化纯化生产要求。
一种质粒 dna 产业化纯化方法

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