本发明包括构建大肠杆菌基因工程菌、菌体活化、制备种子液、发酵罐培养、诱导表达和生物转化。本发明将SEQ ID NO.1所示的羟化酶基因的核苷酸序列，以pET20b为载体，构建重组质粒pET‑C4H，转入到Escherichia coli Tuner(DE3)中，经过筛选得到带有羟化酶基因的大肠杆菌基因工程菌strC4H，诱导表达产生羟化酶，以4‑香豆酸底物，在羟化酶的作用下，4‑香豆酸转化为咖啡酸，提高了咖啡酸的产量，且生物方法制备高效、无污染。
本发明涉及一种郁金香黄烷酮-3-羟化酶TfF3H蛋白及其编码基因，所述蛋白质为由如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质或如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有郁金香黄烷酮-3-羟化酶活性的蛋白质。黄烷酮-3-羟化酶是类黄酮合成通路重要的分支点催化酶，是整个黄酮类化合物代谢途径的中枢。将本发明中郁金香黄烷酮-3-羟化酶基因通过构建反义表达载体转化到橙红色矮牵牛后，50%以上转基因矮牵牛花色变浅，对应的花朵总花色苷含量下降了30%-50%。利用本发明提供的郁金香黄烷酮-3-羟化酶基因TfF3H，能为利用基因工程改变花色，获得创新花色提供一种有效的技术手段。
本发明涉及一种枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因及包括该基因的重组载体和宿主细胞及应用。选自以下核苷酸序列之一：1)具有SEQ ID No.1序列所示的核苷酸序列；2)SEQ ID No.1所示的核苷酸序列添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸的70％的同源序列或者其等位基因及其衍生的核苷酸序列通过提取新鲜枸杞叶片总RNA，用3′RACE技术克隆枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因LmChyB，得到完整的基因序列为939bp。构建了大肠杆菌表达载体pET28a-LmChyB，应用大肠杆菌异源表达系统，对克隆的枸杞胡萝卜素β-羟化酶基因LmLycB编码的酶活性进行了鉴定，枸杞胡萝卜素β-羟化酶LmCHYB能够在β-胡萝卜素中引进两个羟基
