本发明公开了扩增猫冠状病毒E、M、N基因全序列的引物对及其应用。属于分子生物学技术领域。用于扩增猫冠状病毒E、M、N基因全序列的引物对,其核苷酸序列如下:上游引物FCoV‑EMN1:TYTTCTCAGGCGGTTMTA;SEQ ID NO:1;其中,Y为C或T,M为A或C;下游引物FCoV‑EMN2本发明通过一步扩增法,无需多次扩增、裁剪,仅需通过一次PCR扩增即可实现猫冠状病毒E、M、N全基因的扩增,操作简便快捷,避免单个基因扩增的重复性,增加了基因扩增的保真性,并且克服了因基因变异导致的目的片段无法扩增的风险