[发明专利]组合不同温度步骤的核酸转录扩增方法有效
申请号: | 201280062012.6 | 申请日: | 2012-12-14 |
公开(公告)号: | CN104105796B | 公开(公告)日: | 2018-06-08 |
发明(设计)人: | A·拉尤;A·洛朗;L·梅斯塔 | 申请(专利权)人: | 生物梅里埃公司 |
主分类号: | C12Q1/6844 | 分类号: | C12Q1/6844 |
代理公司: | 永新专利商标代理有限公司 72002 | 代理人: | 左路 |
地址: | 法国*** | 国省代码: | 法国;FR |
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摘要: | 本发明涉及转录扩增方法,其中:a)使至少一种存在于生物学样品中的靶核酸与以下化合物接触:扩增引物,进行扩增需要的所有试剂,包括参与扩增的酶,以及至少一种用以稳定实施扩增所需要酶的多元醇,b)在44℃以上的温度加热混合物,c)在44℃以上的温度实施靶核酸转录扩增。本发明还涉及检测通过扩增方法获得的扩增子的方法,对待测靶核酸进行预处理的方法,以及体外诊断存在所述靶核酸的方法。本发明优选应用于医学诊断领域。 | ||
搜索关键词: | 扩增 靶核酸 转录 医学诊断领域 预处理 加热混合物 生物学样品 核酸转录 扩增引物 体外诊断 温度步骤 优选应用 多元醇 扩增子 检测 | ||
【主权项】:
等温转录扩增方法,其中:a)将至少一种存在于生物学样品中的靶核酸与以下化合物接触:●扩增引物,●实施扩增需要的所有试剂,包括参与扩增的酶,以及●至少一种能稳定实施扩增所需要的酶的多羟基化合物,其中的多羟基化合物由以下一种化合物或这些化合物的组合组成:乳糖、山梨醇、蔗糖、甘露醇和海藻糖,b)在存在所有上述化合物的条件下,在大于或等于46℃且小于或等于49℃之间的温度加热混合物,使靶变性,c)在大于或等于46℃且小于或等于49℃之间的温度实施靶核酸转录扩增,其中所述变性和转录扩增组合在一起进行。
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- 本发明公开了一种提高食源性致病微生物LAMP扩增反应效率的方法及其应用,通过向食源性致病微生物LAMP扩增反应体系中添加胶体金材料来实现对LAMP扩增的优化,将胶体金加入LAMP扩增反应体系当中进行等温扩增。本方法可有效提高LAMP扩增反应的灵敏度,并且能够抑制假阳性结果的出现、减少非特异性扩增,从而提高食源性致病微生物的检测效率。该方法可以被应用于食品安全检测领域,具有广泛应用前景。
- 环介导等温扩增法检测苜蓿根腐病菌的引物及方法-201611077019.1
- 兰成忠;阮宏椿;姚锦爱;吴玮 - 福建省农业科学院植物保护研究所
- 2016-11-30 - 2019-08-27 - C12Q1/6844
- 本发明公开了一种环介导等温扩增法检测苜蓿根腐病菌的引物及方法,所述引物包括一组外引物F3/B3和一组内引物FIP/BIP,所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.1‑4所示。所述方法包括:提取待测样品DNA;以DNA为模板,采用所述的引物进行LAMP等温扩增;在LAMP扩增产物中加入荧光染料进行显色,观察LAMP扩增产物的颜色,对产物进行分析,判断是否存在苜蓿根腐病菌。所述的引物及其快速LAMP检测方法可在生产实践中对苜蓿根腐病菌进行快速、灵敏、准确的检测,同时可用于田间病害的早期诊断和病菌的监测和鉴定,并且操作简便易行,为苜蓿根腐病的防治提供可靠的技术和理论依据。
- 一种抑制NEMA从头DNA合成现象的方法及试剂盒-201510426641.8
- 许文涛;黄昆仑;王晨光;翟百强;罗云波;朱鹏宇;徐瑗聪 - 北京福德安科技有限公司;中国农业大学
- 2015-07-20 - 2019-08-16 - C12Q1/6844
- 本发明涉及一种抑制切克内切酶介导等温扩增(NEMA)从头DNA合成现象的方法及相应试剂盒。所述方法为,在试剂盒中使用合适的切克内切酶,增大切克内切酶和dNTP的使用量,添加甜菜碱和海藻糖等辅助因子,从而达到在保证有效扩增的前提下抑制从头DNA合成导致结果无法判定现象。本方法相应试剂盒含有上述反应试剂。本方法实现NEMA扩增结果的有效判定,消除从头DNA合成对反应产生的抑制作用,提高了等温扩增技术的可信度。且操作简单,成本低廉,可用于等温扩增检测手段中。
- 一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法-201910325528.9
- 赵轩;田沺;王少儒;宋燕燕;李惠;蒋尚文;王天洋;万泽中;张楠;范若晨 - 武汉大学
- 2019-04-22 - 2019-08-06 - C12Q1/6844
- 本发明公开了一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成。第一部分是对被测核酸或对照核酸通过延伸反应将二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸(dUDP)掺入基因组序列。第二部分是使用变性聚丙烯酰胺凝胶分析延伸反应结果,经数据处理后得到被测核酸或对照核酸的延伸百分比,进行比较从而实现识别检测N6‑甲基腺嘌呤和N1‑甲基腺嘌呤。该方法克服了现有检测方法设备需求高、操作繁琐等不足,灵敏度高、适应范围广,所用原料简单易得,操作简便。
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