本发明属于生物学检测技术领域,具体涉及一种基于荧光定量PCR标量阳性对照建立的马驽巴贝斯虫病检测试剂盒,用于马属动物感染马驽巴贝斯虫病的临床诊断和日常监测。本发明通过设计检测引物如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示和荧光探针如SEQ ID No.3所示,结合荧光定量PCR系统绝对定量分析,通过优化反应体系和循环条件,建立马驽巴贝斯虫病荧光PCR并建立一种基于荧光定量PCR标量的马驽巴贝斯虫病荧光PCR检测试剂盒,适用于马驽巴贝斯虫病的临床诊断和流行病学监测。
本发明公开了一种东方巴贝斯虫凝血酶素基因1,该基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明还公开了编码所述东方巴贝斯虫凝血酶素基因1的重组蛋白,该重组蛋白具有如序列表SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。该重组蛋白可有效检测感染东方巴贝斯虫的水牛的抗原的存在,具有良好的反应原性,是开发检测东方巴贝斯虫病血清学诊断方法的候选因子,有助于控制水牛的巴贝斯虫病在我国的流行和传播。
本发明公开一种牛巴贝斯虫棒状体蛋白的扩增引物,由这对引物构成的检测试剂,由这对引物制备的重组牛巴贝斯虫棒状体抗原蛋白,以及这一重组蛋白的用途。本发明的牛巴贝斯虫抗原重组蛋白的制备方法是以牛巴贝斯虫基因组DNA为模板,以引物对SEQ ID No.1和SEQ ID No.2进行扩增,将扩增产物和表达载体双酶切后进行连接,再转入大肠杆菌中诱导表达。用本发明的引物得到的重组抗原建立的间接ELISA检测方法可有效检测和区分感染牛的牛巴贝斯虫病和双芽巴贝斯虫病,完全避免了现有技术的不足。
本发明公开一种牛巴贝斯虫鉴别检测与疾病检测的方法与试剂盒。本发明的鉴别检测牛巴贝斯虫的方法是:利用扩增引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2将待检牛的基因组DNA样本与牛巴贝斯虫标准质粒扩增后,进行高分辨率熔解曲线分析,根据待检样品绘制的熔解曲线与标准质粒熔解曲线的重合与否,判定待检样品中巴贝斯虫的种类。本方法囊括了国内现存的所有牛巴贝斯虫病原,可同时进行五种牛巴贝斯虫病原的鉴别检测,适用于牛巴贝斯虫种的鉴别检测和流行病学调查。
本发明公开一种牛双芽巴贝斯虫棒状体蛋白的扩增引物,由这对引物构成的检测试剂,由这对引物制备的重组牛双芽巴贝斯虫棒状体抗原蛋白,以及这一重组蛋白的用途。本发明的牛双芽巴贝斯虫抗原重组蛋白的制备方法是以牛双芽巴贝斯虫基因组DNA为模板,以引物对SEQ ID No.1和SEQ ID No.2进行扩增,将扩增产物和表达载体双酶切后进行连接,再转入大肠杆菌中诱导表达用本发明的引物得到的重组抗原建立的间接ELISA检测方法可有效检测和区分感染牛的双芽巴贝斯虫病和牛巴贝斯虫病,完全避免了现有技术的不足。
本发明公开一种犬巴贝斯虫病检测试剂盒及非疾病诊断方法。本发明的检测犬巴贝斯虫试剂盒中至少包括有序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的两条扩增引物。利用本发明的试剂盒进行检测的方法具有重复性好、灵敏度高、速度快和全封闭反应等优点,检测方法具有特异性好、敏感性高和可重复性的特点,使其能更好地用于犬体内梨形虫的鉴别检测。本方法囊括了国内现存的犬巴贝斯虫病病原,检测范围广,可用于犬巴贝斯虫种的鉴别检测和流行病学调查。
本发明公开了东方巴贝斯虫1‑脱氧‑D‑木酮糖‑5‑磷酸还原异构酶基因,该基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,本发明还公开了所述基因所编码的蛋白,该蛋白具有如序列表SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列本发明公开的重组蛋白可有效检测感染水牛血液中的东方巴贝斯虫病抗原的存在,具有良好的反应原性,有助于控制水牛的巴贝斯虫病在我国的流行和传播。