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[发明专利]将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一个整合位点的方法-CN201010563647.7有效
发明人：廖东庆;李晓明;黄日波;张云光;韦玉琴;梁莲华;李丛 -专利权人：南宁邦尔克生物技术有限责任公司
申请日： 2010-11-29 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了将两个或两个以上外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体同一整合位点的方法。首先将外源基因表达单元克隆到含抗性基因筛选标记A的整合质粒，利用整合质粒将外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体获得重组菌1，然后利用替换抗性基因筛选标记的质粒将重组菌1中的抗性基因筛选标记A替换为另一抗性基因筛选标记整合质粒再转化重组菌2，通过抗性基因筛选标记A和B进行筛选得到包含两个外源基因表达单元的重组菌。重复替换抗性基因和整合，可以获得两个以上相同或不同的外源基因表达单元整合到枯草芽孢杆菌染色体的重组菌。这种方法对构建整合型枯草芽孢杆菌表达菌株具有重要的应用前景。
两个以上基因表达单元整合枯草芽孢杆菌染色体同一个方法

[发明专利]在大肠杆菌或芽孢杆菌中分泌表达外源基因的表达载体及其构建-CN200510081648.7有效
发明人：王正祥;牛丹丹 -专利权人：江南大学
申请日： 2005-06-27 - 公布日： 2006-01-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：在大肠杆菌或芽孢杆菌中分泌表达外源基因的表达载体及其构建，属基因工程技术领域。本发明的表达载体pBL－WZX含有一个在大肠杆菌或芽孢杆菌中皆具有功能的启动子序列，含有一个在大肠杆菌或芽孢杆菌中皆具有功能的信号肽序列，含有一个供外源基因克隆的多克隆位点，含有一个人工转录终止序列，含有一个可在大肠杆菌或芽孢杆菌中进行克隆选择的遗传标记和含有一个供外源基因在芽孢杆菌的染色体DNA中进行整合和基因拷贝数扩增DNA序列。表达载体pBL－WZX具有引导外源基因转录和翻译并将基因产物分泌到细胞外的能力，在大肠杆菌中介导外源基因分泌表达的水平可达到1mg/mL以上，在芽孢杆菌中介导外源基因分泌表达的水平可达到3.1mg/mL
大肠杆菌芽孢杆菌分泌表达基因载体及其构建

[发明专利]一种Cre/loxP基因删除系统及其应用-CN201810310003.3在审
发明人：罗克明;杨晨;葛佳;窦立雯;汪丽君 -专利权人：西南大学
申请日： 2018-04-09 - 公布日： 2018-09-07 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种Cre/loxP基因删除系统及其应用。该系统包括植物表达载体I和II；植物表达载体I包括两个同向的loxP位点，所述的同向loxP位点间依次插入有目标基因I的表达元件和NCre的表达元件；植物表达载体II包括两个同向的loxP位点，所述的同向loxP位点间插入有CCre的表达元件。其能够使外源基因在转基因作物的营养生长阶段正常表达，能保持外源基因所带来的优良性状，转基因作物进入生殖生长阶段，发生对外源基因的删除，从而收获无外源基因的果实和种子，消除转基因安全隐患；其还具有高效性和简洁性
同向位点植物表达载体基因删除系统转基因作物外源基因生殖生长阶段营养生长阶段植物基因工程安全隐患目标基因高效性简洁性无外源源基因转基因性状应用删除果实基因收获

[发明专利]一种非编码的核苷酸序列及其在提高外源基因表达水平的应用-CN202110133688.0有效
发明人：王芳;武海军;严丹侃;周本国;韩科雷;董庆;陈莹;马超 -专利权人：安徽省农业科学院烟草研究所
申请日： 2021-02-01 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种非编码的核苷酸序列及其在提高外源基因表达水平的应用，属于生物技术领域，该核苷酸序列如SEQ ID NO.1，与现有技术相比，该核苷酸序列能够在翻译水平上显著提高外源基因的表达水平，为外源基因的过量表达提供了新的途径，对外源基因编码蛋白的表达具有显著促进作用，具有较强的应用价值。
一种编码核苷酸序列及其提高基因表达水平应用

[发明专利]一种在水稻茎节和穗特异表达的启动子GMS1P及其应用-CN201810847326.6有效
发明人：黄培劲;龙湍;唐杰;吴春瑜;刘昊;李佳林;李新鹏;曾翔;吴永忠 -专利权人：海南波莲水稻基因科技有限公司
申请日： 2018-07-27 - 公布日： 2021-03-02 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种在水稻茎节和穗特异表达的启动子GMS1P及其应用，涉及基因工程与分子生物学领域。本发明启动子GMS1P具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，本发明进一步提供含有启动子GMS1P的表达载体、基因表达盒，工程菌或细胞系。本发明还提供了扩增茎节和穗特异性启动子的引物对。本发明的茎节和穗特异启动子为水稻内源基因，对水稻基因工程十分有利，能够驱动外源基因在茎节和穗中特异性表达且表达水平精确，提供了驱动外源基因在水稻茎节和穗中特异性表达的新方法。
一种水稻特异表达启动子 gms1p 及其应用

[发明专利]花生球蛋白Ara3基因启动子在驱动外源基因在转基因植物种子中特异表达上的应用-CN200910038619.0无效
发明人：黎茵;钟玉娟;黄上志;林晓东 -专利权人：中山大学
申请日： 2009-04-14 - 公布日： 2009-09-23 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开一种花生球蛋白Ara 3基因启动子在驱动外源基因在转基因植物种子中特异表达的应用，该启动子为花生球蛋白基因Ara 3上游第1位～第634位共长634bp的序列。本发明的启动子可与外源基因连接插入表达载体中构建重组表达载体，转化宿主细胞或宿主组织及其后代，实现植物的品质改良或生产外源蛋白。本发明的启动子把外源基因的表达局限在种子或胚组织中，避免了外源蛋白在成熟的根茎等器官中的积累所造成的对植物生长的影响和能量物质的浪费。本发明的启动子诱导外源基因在种子中特异表达，且表达产物被贮存在成熟种子中，有利于表达产物的高水平累积，且可在常规条件下长期保存，也有利于表达产物的纯化回收。
花生球蛋白 ara3 基因启动子驱动转基因植物种子特异表达应用

[发明专利]豆科植物叶片组织特异性启动子及其应用-CN201510064426.8有效
发明人：李轩;荆新云;余曜;戴小密 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2015-02-06 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：具体地，本发明人从大量的豆科植物基因中筛选到一种特别适合驱动外源基因在植物叶片特异性表达，而在豆科植物其他部位不表达的启动子。本发明启动子的表达特异性和专一性很高。本发明还提供了具有所述启动子的构建物、表达盒和载体等。含本发明启动子的转基因豆科植物可以特异性地改善豆科植物叶片的农艺性状，并有效避免外源基因导入对豆科植物其他组织的影响。
豆科植物叶片组织特异性启动子及其应用

[发明专利]重组VSV病毒载体和重组VSV病毒及其制备方法和用途-CN03156144.6无效
发明人：邓宏魁;丁明孝;聂玉春;袁菲;王在;郭延平;胡建军;李锦全;易凌 -专利权人：北京大学
申请日： 2003-09-01 - 公布日： 2005-03-09 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明构建了包含VSV(水疱性口炎病毒)病毒基因组、可携带外源基因，能恢复出重组VSV病毒的重组VSV病毒载体，还制备了具有复制功能及感染性，可在被感染的宿主细胞中增殖并表达基因组中所携带的外源基因的重组本发明将上述病毒载体及重组病毒用于高效表达外源基因，所表达的外源基因产物可被纯化，或直接将重组VSV病毒用于感染实验动物而获得外源基因产物的抗体或中和抗体，并可用于各种病毒或细菌性疾病的疫苗研制。
重组 vsv 病毒载体及其制备方法用途

[发明专利]一种在植物生长的特定时期内表达的水稻种子特异性启动子-CN201710500093.8有效
发明人：李娟;杨剑波;杨亚春;李莉;秦瑞英;李浩;许蓉芳 -专利权人：安徽省农业科学院水稻研究所
申请日： 2017-06-27 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供一种在植物生长的特定时期内表达的水稻种子特异性启动子，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，所述启动子在种子发育过程中能够驱动目标基因特异表达，但当种子成熟后至干种子时，驱动活性消失。本发明还提供了含有该启动子的表达盒和植物表达载体及应用。具体而言，本发明将上述启动子应用在植物转基因工程中，该启动子可以启动外源基因在植物中表达，适用于任何植物，尤其能够驱动外源基因在水稻植株的种子发育过程中特异表达，因此可以用于培育理想的水稻品种，提高水稻产量和品质
一种植物生长特定时期表达水稻种子特异性启动子

[发明专利]SSA4基因启动子及利用该启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体-CN201911047256.7在审
发明人：张亚菲;黄义德;林尧;洪文柄 -专利权人：福建师范大学
申请日： 2019-10-30 - 公布日： 2019-12-20 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了SSA4基因启动子及利用该启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体。所述SSA4基因启动子的序列如SEQ ID NO:1所示。利用SSA4基因启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体包括胞内表达和胞外分泌型表达两种。本发明获得的SSA4基因启动子以及所构建的表达载体可以有效的提高外源蛋白在毕赤酵母中的表达，同时可以满足更多启动子的选择。
基因启动子毕赤酵母表达载体驱动外源基因转录胞外分泌型胞内表达多启动子外源蛋白启动子构建

[发明专利]一个烟草强核基质结合序列及其分离鉴定方法与应用-CN02135530.4无效
发明人：郑成超;张可伟;王健美;杨国栋 -专利权人：山东农业大学
申请日： 2002-09-13 - 公布日： 2003-03-12 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一个烟草强核基质结合序列(MAR)及其分离鉴定方法和应用，属细胞生物学和真核基因表达调控领域。具体涉及从烟草基因组中分离出一段新的强MAR序列，具有典型的MAR序列特征，在体外与核基质有较强的特异结合能力。将该MAR序列应用于植物基因表达载体的构建，即将其顺向构建到表达载体pBI121gus基因表达盒两侧(见附图1)，以不加MAR序列的表达载体pBI121作为对照，转化烟草，GUS酶活检测证明该MAR序列可使外源基因gus基因的平均表达水平比对照提高5倍。表明分离得到的烟草新MAR序列是一个很强的增强子元件，可以极大的提高外源基因在转基因植物中稳定、高效表达水平，能够作为一个重要增强元件用于各种类型的植物高效表达载体的构建，应用于植物基因工程的研究和产业化
一个烟草基质结合序列及其分离鉴定方法应用

[发明专利]杆状病毒全期启动子盒及含该全期启动子盒的载体系统-CN97114311.0无效
发明人：王珣章;龙綮新;吴文言;曲士芮;庞义 -专利权人：中山大学
申请日： 1997-11-24 - 公布日： 1998-07-29 - 主分类号： C12N15/33 文献下载
摘要：本发明将杆状病毒的p35启动子与人工合成后期启动子(Psyn)、多角体XIV启动子(PXIV)串联构成全期启动子盒。并构建出含有该全期启动子盒的杆状病毒载体系统。该载体系统能实现对外源基因的全期高效表达;另外,由于该载体系统在插入外源基因的同时保留了全部病毒基因,所得重组病毒可形成多角体,故此系统除可用作表达载体外,还可用于新型病毒基因工程杀虫剂的研制。
杆状病毒启动子载体系统

[发明专利]一种双质粒共转化外源基因高表达基因工程菌-CN201710910423.0有效
发明人：王昌华;杨珺;刘刚;徐俊;孙正祥 -专利权人：天津昕因达生物技术有限公司
申请日： 2017-09-29 - 公布日： 2021-10-15 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明提供了一种基因工程菌及其制备方法，以双营养缺陷型菌株作为表达宿主，表达宿主通过一次电转化同时转入两种载体，其中一种载体含有外源目的基因、以及表达宿主的一种营养缺陷的补偿基因，另一种载体含有UPR关键基因HAC1p、以及表达宿主的另一种营养缺陷的补偿基因。本发明提供的工程菌含有不同基因剂量的功能基因和外源目的基因，能够通过筛选获得分泌表达外源目的基因高产工程菌株。
一种质粒转化基因表达基因工程

[发明专利]一种表达外源荧光蛋白球虫的构建方法-CN202011502338.9有效
发明人：曲自刚 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2021-12-17 - 主分类号： C12N1/11 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达外源荧光蛋白球虫的构建方法，属于基因工程技术领域。表达外源荧光蛋白球虫的构建方法，针对球虫的目的基因设计gRNA，构建含gRNA的基因编辑质粒；构建含目标基因和mCherry基因的同源重组质粒；将基因编辑质粒和同源重组质粒共同转染球虫的子孢子；将转染后的子孢子感染动物，筛选，得到表达外源荧光蛋白球虫。本发明利用基因编辑技术和同源重组技术相结合在球虫基因组中敲入荧光蛋白mCherry基因和筛选基因，构建的球虫能稳定高效表达荧光信号。所述构建方法不仅能成功构建表达有外源荧光蛋白球虫而且荧光蛋白表达稳定且效率高，适用于球虫的生长、基因工程或药物筛选方面的研究。
一种表达荧光蛋白构建方法

[发明专利]莱茵衣藻分泌型表达载体及分泌型表达系统的构建方法-CN201110070784.1有效
发明人：胡章立;吴锦霞;陈俊 -专利权人：深圳大学
申请日： 2011-03-23 - 公布日： 2011-09-14 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了莱茵衣藻分泌型表达载体及分泌型表达系统的构建方法，本发明利用来源于莱茵衣藻分泌型蛋白的氨基酸序列，通过信号肽预测软件预测其信号肽基因序列，对预测获得的信号肽基因进行人工合成，并将其插入到莱茵衣藻表达载体的启动子和克隆位点之间，构建了莱茵衣藻分泌型表达载体。同时，利用外源基因检测构建的莱茵衣藻分泌型表达载体的表达效率，将含有外源基因的莱茵衣藻分泌型表达载体，通过莱茵衣藻遗传转化法，转化到莱茵衣藻，经过筛选，获得能分泌表达外源基因的转基因工程藻株。本发明为利用莱茵衣藻作为生物反应器分泌表达外源基因奠定了基础。
莱茵衣藻分泌表达载体系统构建方法

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