本发明公开了十足目虹彩病毒1的单域抗体及其制备方法和应用;所述单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示,基因序列如SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4所示;同时本发明还提供一种十足目虹彩病毒1的单域抗体的制备方法,以成年健康的条纹斑竹鲨作为免疫对象,采用DIV1为抗原进行免疫;通过分离免疫条纹斑竹鲨外周血淋巴细胞,提取总RNA,再反转录为cDNA;以cDNA为模板,扩增条纹斑竹鲨vNAR片段,与载体连接构建噬菌体文库;从噬菌体文库中淘选识别DIV1的阳性克隆;构建表达载体,诱导表达DIV1单域抗体,最终获得十足目虹彩病毒1的单域抗体;本发明还将十足目虹彩病毒1的单域抗体用于检测十足目虹彩病毒