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[发明专利]一种2BS细胞在生物反应器内的多倍放大方法-CN202111679237.3在审
发明人：李祖成;蒋东阳;任政华;伍活镰 -专利权人：广州齐志生物工程设备有限公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：包括：S01，种子细胞的制备：用转瓶培养2BS种子细胞，长成致密单层后消化并做成细胞悬浮液，接种到一级生物反应器内贴壁培养，获得2BS种子细胞；S02，在线多倍数放大：2BS种子细胞在生物反应器的微载体上长成致密单层，用灭菌PBS清洗微载体，将载体洗透白，去除培养液和血清；调节pH值和温度，加入胰酶与微载体充分混合，消化后加入含血清培养基终止消化，接种到二级生物反应物器中，补加培养液进行细胞培养以放大2BS细胞。通过上述培养方法使2BS的贴壁率高达95%以上，突破了2BS细胞在Cytodex1微载体上贴壁率不高容易脱落的技术门槛。
一种 bs 细胞生物反应器放大方法

[发明专利]一种人工蝉花的制备方法-CN201510595005.8在审
发明人：刘科 -专利权人：成都朴锐生物科技有限公司
申请日： 2015-09-17 - 公布日： 2015-11-25 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：一种人工蝉花的培养方法，包括以下步骤：一级培养基灭菌后斜面接种，将菌丝打碎。然后将菌液接入其他装有培养基的三角瓶中。摇床振荡培养，6天终止培养，转入第二级培养。二级培养采用牛乳培养基，灭菌后冷却，加入种子液，摇匀。摇床振荡培养，振荡培养6天终止培养，转入第三级扩大培养。三级培养所用培养基成分为含葡萄糖的纯牛乳，培养发酵结束后减压抽滤分离蝉花发酵培养液和菌丝体混合物，发酵滤液通过喷雾干燥机进行干燥获得滤液干粉，菌丝体滤饼通过烘干机进行干燥，然后再粉碎过80目，获得菌丝体干粉
一种人工制备方法

[发明专利]一种饥饿微生物菌剂及其在烟叶发酵中的应用-CN202310238691.8在审
发明人：王秋领;冯颖杰;杨金初;杨宗灿;张婷婷;魏明杰;刘文召;刘强;王二彬;赵声辰 -专利权人：河南中烟工业有限责任公司
申请日： 2023-03-14 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种饥饿微生物菌剂及其在烟叶发酵中的应用，该饥饿微生物菌剂制备方法为：将克雷伯氏菌接种到LB液体培养基中，培养得一级种子液；一级种子液与LB液体培养基混合，培养得二级种子液；二级种子液与三级种子培养基混合，培养得三级种子液；三级种子液离心去上清，沉淀加去离子水得一级饥饿种子；一级饥饿种子与烟草水提液混合得二级饥饿种子；二级饥饿种子离心，沉淀复溶，得到饥饿微生物菌剂。
一种饥饿微生物及其烟叶发酵中的应用

[发明专利]防治香料烟镰刀型枯萎病的生防菌株NKY122及其生防菌剂-CN201310293558.9无效
发明人：张晨东;孔垂思;肖植文;余磊;邱学礼;杨谨;付斌;余小芬;赵建荣;苏源;陆自芹 -专利权人：云南省烟草农业科学研究院;云南省农业科学院;昆明学院
申请日： 2013-07-12 - 公布日： 2013-11-27 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：菌剂经如下步骤得到：菌株NKY122移植到试管中活化，35℃培养48小时；活化后的菌苔移入用1000ml三角瓶装的800ml NA培养液中，在150转/min、35 ℃下培养48小时，获得一级发酵菌液；一级发酵菌液按接种量1：200比例接种于种子罐中的NA培养液中，种子罐的温度35～37℃，发酵48小时后，获得二级发酵用菌种液；二级发酵用菌种液按接种量1：20比例接种于发酵罐，温度35～37℃，发酵96小时储存作为生防菌液，2000rpm离心5 min，与专用保藏液配成菌剂，使菌剂中活菌总浓度为1×1011～1×1012 CFU/ml。
防治香料镰刀枯萎病菌株 nky122 及其生防菌剂

[发明专利]一种游离赖氨酸发酵方法-CN202211311822.2在审
发明人：黄永嫦;鲁立;欧雅莉;谢学敏;黄健华;宾桂青 -专利权人：广东肇庆星湖生物科技股份有限公司
申请日： 2022-10-25 - 公布日： 2022-12-16 - 主分类号： C12P13/08 文献下载
摘要：本发明属于发酵化工技术领域，具体为一种游离赖氨酸发酵方法，其步骤为：配制一级种子培养基、二级种子培养基、发酵培养基，这三种培养基完全溶解后分别进行灭菌处理；然后进行一级种子液的培养；将一级种子液按0.1‑0.2％的体积比例接入二级种子培养基中培养对数生长期的二级种子液，最后将二级种子液按5‑20％的体积比例接入发酵培养基中好氧发酵，30‑35℃、300‑600rpm、溶氧≥20％、pH 7.0‑7.8本发明通过培养基成份的调整、发酵PH环境的维持及温和的除菌方法的改良，得到高产的含游离赖氨酸的发酵液，特别适用于大生产的需要。
一种游离赖氨酸发酵方法

[发明专利]浓香型白酒窖泥新型培养方法-CN201110262346.5有效
发明人：陈克川 -专利权人：四川省春之源酒业有限公司
申请日： 2011-09-07 - 公布日： 2012-01-11 - 主分类号： C12G3/02 文献下载
摘要：浓香型白酒窖泥新型培养方法为酿酒领域。己酸菌合成培养液复壮沙土管保藏的巳酸菌和优质窖泥浸出汁作种子做一级培养，均加己酸菌合成培养液做二、三级培养，加酵母自溶培养液中加溶解的磷酸氢二钾及乙酸钠各60克、硫酸镁30克、优质窖泥浸出汁1L做四级培养，酵母自溶培养液中加溶解的磷酸氢二钾及乙酸钠各700克、硫酸镁350克、优质窖泥1公斤、麦曲粉9公斤、四级种子做五级培养，将粘土40公斤、污泥60公斤、新鲜酒糟及麦曲及新鲜黄水及五级种子各10公斤、豆饼粉及优质窖泥各1公斤、磷酸氢二钾及乙酸钠各0.2公斤、硫酸镁0.1公斤、30度白酒4公斤翻拌均匀保温35-37℃培养30天成新窖泥。
浓香白酒新型培养方法

[发明专利]一种应用生物酶的红霉素制备方法-CN201410596453.5有效
发明人：吴鹏;王双平;陈龙 -专利权人：宁夏乙征生物工程有限公司
申请日： 2014-10-30 - 公布日： 2018-01-12 - 主分类号： C12P19/62 文献下载
摘要：本发明提供了一种应用生物酶的红霉素制备方法，包括以下步骤(1)取红色链霉菌菌种接种于一级种子培养基中，培养得一级种子液；(2)将一级种子液接种于二级种子培养基中，培养得二级种子液；(3)将二级种子液接种于发酵培养基中，培养过程中补加豆油、脂肪酶、玉米浆、蛋白酶等物质，培养一定时间后得到高红霉素含量的发酵液。上述红霉素的制备方法，通过发酵培养基及培养过程的控制的优化，特别是通过引入生物酶，提高了原料利用率及红霉素的发酵水平，简化工艺，降低了生产成本。
一种应用生物酶红霉素制备方法

[发明专利]一种提高浓香型白酒发酵酒醅中己酸乙酯含量的方法-CN201910115021.0在审
发明人：陈臣;崔海灏;杨月轮 -专利权人：十里香股份公司
申请日： 2019-02-14 - 公布日： 2019-04-12 - 主分类号： C12G3/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高浓香型白酒发酵酒醅中己酸乙酯含量的方法，拜耳结合酵母菌活化：将保藏的拜耳结合酵母菌接入液体YEPD培养基中进行活化，活化2‑3次，得到菌种性能稳定的培养液；种子培养液制备：将活化好的拜耳结合酵母菌在YEPD液体培养基中进行扩大培养，该功能菌进行二级扩大培养，扩大培养完成后得到种子培养液；接种：将窖池酒醅分为上、中、下三层，分别向三层酒醅中接种拜耳结合酵母菌，其他工艺与原工艺相同，封池发酵。
酵母菌活化浓香型白酒发酵酒醅己酸乙酯种子培养液扩大培养酒醅三层接种培养液二级扩大培养功能微生物白酒产业传统产业现实意义保藏功能菌窖池菌种制备白酒酿酒发酵升级改造

[发明专利]黑曲霉发酵产柠檬酸的方法-CN201911235659.4有效
发明人：熊结青;刘梦涵;杨儒文;佟毅;李义;朱光耀;卜庆阳 -专利权人：中粮生物科技股份有限公司
申请日： 2019-12-05 - 公布日： 2023-01-13 - 主分类号： C12P7/48 文献下载
摘要：本发明涉及微生物发酵领域，公开了一种黑曲霉发酵产柠檬酸的方法，其中，该方法包括：将黑曲霉接种于一级种子培养基中进行培养，制备含有黑曲霉菌球的一级种子液；将所述一级种子液中的黑曲霉菌球进行分散处理，使黑曲霉菌球形成平均长度为20‑40μm的菌丝；将经分散处理后的一级种子液接种于二级种子培养基中进行培养，制备含有黑曲霉菌球的二级种子液，二级种子液中的黑曲霉菌球的平均直径为30‑50μm；将含有黑曲霉菌球的二级种子液接种于发酵培养基进行柠檬酸发酵本发明的方法降低了黑曲霉种子制作量，缩短了黑曲霉种子制作周期，提高了黑曲霉种子质量稳定性，使用本发明的黑曲霉种子发酵柠檬酸，产量和发酵转化率均较高。
曲霉发酵柠檬酸方法

[发明专利]一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法及应用-CN202011563981.2在审
发明人：李季;丁国春;陈彦廷 -专利权人：中农新科（苏州）有机循环研究院有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2021-04-02 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种好氧发酵耐盐复合微生物菌剂的制备方法，主要包括以下步骤：提供菌种原料和培养基；斜面培养；制备一级种子培养液；制备二级种子培养液；制备混合发酵培养液。
一种发酵复合微生物制备方法应用

[发明专利]一种四乙酰植物鞘氨醇的发酵生产方法-CN202211149700.8在审
发明人：但彦春;杨艳舒;廖鹏 -专利权人：重庆智合生物医药有限公司
申请日： 2022-09-21 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12P13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种四乙酰植物鞘氨醇的发酵生产方法，所述四乙酰植物鞘氨醇的发酵生产方法包括如下步骤：将产生四乙酰植物鞘氨醇的菌种进行活化，得到种子液；将种子液接种至种子培养基中进行一级培养，得到一级种子液，再将一级种子液接种至种子培养基中进行二级培养，得到二级种子液；将二级种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养、放罐；本发明发酵生产方法通过培养基、发酵工艺的优化，并配套最优糖点分段控制工艺、pH值分段控制工艺
一种乙酰植物鞘氨醇发酵生产方法

[发明专利]一种大肠杆菌活化发酵方法-CN201911065376.X在审
发明人：周丽;孙磊 -专利权人：宁波酶赛生物工程有限公司
申请日： 2019-11-04 - 公布日： 2020-02-18 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明适用于微生物技术领域，提供了一种大肠杆菌活化发酵方法，包括：取出大肠杆菌接种于培养基上，得到一级平板；取单菌落继续接种于培养基上，得到二级平板；取多个单菌落接种于液体培养基中，旋转培养得到一级种子液；取一级种子液继续接种于液体培养基中，旋转培养得到二级种子液；取二级种子液接种于发酵底液中进行发酵，并采取溶氧反馈的方式进行补料；加入诱导培养基诱导蛋白表达，并采取恒pH补料进行补料继续进行发酵。本发明实施例提供的大肠杆菌活化发酵方法，通过两次平板培养以及两次液体培养，得到二级种子液，能够有效地实现菌种的复壮，有效提高了后续发酵过程的稳定性以及目标产物的表达量。
一种大肠杆菌活化发酵方法

[发明专利]一种赤藓糖醇的高温发酵调控方法-CN202110963670.3在审
发明人：黄永嫦;谢畅丰;王海波;陆琴英 -专利权人：广东肇庆星湖生物科技股份有限公司
申请日： 2021-08-20 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： C12Q3/00 文献下载
摘要：步骤为①将菌种活化培养至驯化单株；②将步骤①的驯化单株接入一级种子培养基，进行种子扩大培养至对数生长期得一级种子液；③将步骤②的一级种子液按0.01‑0.1％(V/V，)的比例接入二级种子培养基进行扩大培养至对数生长期得二级种子液；④将步骤③的二级种子液按10％(V/V，)比例移入已灭菌的发酵培养基进行好氧发酵得赤藓糖醇，本发明从菌种驯化、种子扩大培养和种子发酵需对菌株进行温度适应性驯化培养，对菌体生长环境的人为干预，发酵过程温度是阶梯式提升
一种赤藓糖高温发酵调控方法

[发明专利]一种固态发酵制备粪肠球菌的方法-CN201510230840.1有效
发明人：肖前青;郑云峰;陆克文 -专利权人：上海邦成生物工程有限公司
申请日： 2015-05-08 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种固态发酵制备粪肠球菌的方法，该方法包括以下步骤：(1)将粪肠球菌种子接种到一级种子培养基中，于35～40℃、微氧条件下培养16～25h，得到一级种子液；(2)将步骤(1)得到的一级种子液接种到种子罐的二级种子培养基中扩大培养，在35～40℃、微氧条件下培养16～20h，得到二级种子液；(3)将步骤(2)得到的二级种子液接种到发酵罐的发酵培养基中培养，在35～40℃、微氧条件下发酵16～30h，得到三级种子液；(4)将步骤(3)得到的三级种子液与固态培养基混合均匀，装袋发酵培养36～80h，制得发酵鲜料；(5)将步骤(4)得到的发酵鲜料干燥后，即制得固态发酵粪肠球菌成品。
一种固态发酵制备球菌方法

[发明专利]一种截短侧耳素预混剂的生产方法-CN202010883030.7在审
发明人：冷董碧;冒永松;张力波;匡小波;祁飞翔 -专利权人：江苏兴鼎生物工程有限公司
申请日： 2020-08-28 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： A61K31/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种截短侧耳素预混剂的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（一）、对培养基进行发酵灭菌，将培养基投入种子罐或发酵罐中，通入蒸汽，控制压力0.1MPa，温度120℃～121℃，灭菌30 min～35min，降温至25℃～30℃待用，得到一级种子罐和二级种子罐；（二）、一级种子培养：摇瓶种子培养后接种到灭菌好的一级种子罐进行一级种子培养，通入无菌空气，控制罐压0.03 MPa～0.05MPa，控制温度25℃～30℃，培养2～4天；（三）、二级种子培养：将培养好的一级种子液接种到灭菌好的二级种子罐进行二级种子培养，通入无菌空气，控制罐压0.03 MPa～0.05MPa，控制温度25℃～30℃，培养2～3天。
一种侧耳素预混剂生产方法