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[发明专利]一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系-CN201410408788.X有效
发明人：王文秀;沈志强;于金枝 -专利权人：山东省滨州畜牧兽医研究院
申请日： 2014-08-19 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种建立鹅胚上皮细胞系的方法及建立的鹅胚上皮细胞系。本发明涉及一种建立鹅胚上皮细胞系的方法，其特征在于将原代鹅胚胎组织贴壁法、差速酶消化法和单克隆筛选方法相结合，优化了原代培养条件。本发明还涉及所述方法建立的鹅上皮细胞系，其保藏号为CCTCC C2014137，该细胞系的建立解决了目前尚未有完善的鹅源细胞系的问题。本发明还涉及一种用于培养和/或增殖小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的待感染宿主细胞即为或包括所述的鹅胚上皮细胞系。本发明，验证了所述鹅胚上皮细胞系对小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒及I型鸭肝炎病毒及新型鸭肝炎病毒感染的敏感特性。
一种建立上皮细胞系方法

[发明专利]一种快速分离培养人气道上皮细胞的方法及优化培养基-CN201711223340.0有效
发明人：刘晓明;杨佳丽;石娟;何进喜;贾圆圆;薛菁;夏鹤春 -专利权人：宁夏医科大学总医院
申请日： 2017-11-29 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种快速分离培养人气道上皮细胞的方法及优化培养基，该优化培养基包括DMEM培养基、F‑12Nutirient Mix培养基、0.5mg/ml的氢化可的松、胎牛血清、25ug/ml的表皮生长因子本发明利用优化的培养基培养人气道上皮细胞的方法，不仅大大的简化了需要3T3 J2细胞为饲养层而培养上皮细胞的步骤，只需要将链霉蛋白酶消化的原代人气道上皮细胞培养于本发明优化的培养基中，且获得了快速分离且无限传代培养的人气道上皮细胞，将传代培养的人气道上皮细胞进行体外扩增培养，达到20代以上，即可获得足够量的种子细胞用于如体外细胞互作模型研究等诸多后续的体内外研究中。
一种快速分离培养人气上皮细胞方法优化培养基

[发明专利]一种人源视网膜色素上皮细胞的程序性降温冻存的方法及应用-CN201810694183.X在审
发明人：方攀峰;张俊克;范国平;王云娟 -专利权人：江苏艾尔康生物医药科技有限公司
申请日： 2018-06-29 - 公布日： 2019-06-11 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种人源视网膜色素上皮细胞(RPE)的程序性降温冻存的方法，属于生物医学技术领域。所述方法包括：(1)成熟RPE细胞的消化处理：对培养成熟的人源视网膜色素上皮细胞RPE细胞采用酶消化法进行收集，计数，用冻存液重悬细胞，分装至冻存管；(2)将所述冻存管转移至程序性降温仪中进行冷冻冻存；(3)获得冻存的人源视网膜色素上皮细胞。本发明方法通过使用程序性降温仪按特定的降温程序对人源视网膜色素上皮细胞进行冻存。本发明利用不同降温程序冻存RPE细胞，进而摸索最佳的冻存程序。本发明提供的人源视网膜色素上皮细胞的冻存方法为短期或者长期保存，以及今后使用的RPE细胞治疗AMD(老年黄斑变性)等RPE损伤疾病提供了新来源。
冻存视网膜色素上皮细胞人源降温程序冻存管降温仪老年黄斑变性生物医学技术长期保存酶消化法消化处理冻存液分装重悬成熟冷冻损伤细胞疾病治疗应用

[发明专利]人羊膜上皮细胞的无血清培养基-CN201810046590.X在审
发明人：徐辉明 -专利权人：徐辉明
申请日： 2018-01-17 - 公布日： 2018-06-08 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及人羊膜上皮细胞的无血清培养基。本发明公开了一种人羊膜上皮细胞的无血清培养基，其包含细胞基础培养基和培养因子，以细胞基础培养基体积为基准，所述培养因子及其含量分别为UltraGROTM‑Advanced，体积比2％‑10％；Supplement本发明人羊膜上皮细胞的无血清培养基不引入外源性基因，不改变细胞的基因组稳定性，无动物源成分，无致瘤风险，且不涉及饲养层细胞等外源性细胞混杂而导致的干细胞移植安全问题，能有效地体外扩增其细胞数量；同时保持其质量和羊膜上皮细胞的干细胞性和上皮特性
人羊膜上皮细胞无血清培养基细胞基础培养基羊膜上皮细胞体积比细胞基因组稳定性生物技术领域干细胞移植饲养层细胞外源性基因无血清培养安全问题谷氨酰胺动物源干细胞地体外扩致瘤混杂引入

[发明专利]一种乳腺上皮类器官模型构建方法-CN202210656281.0在审
发明人：黄建;陈志刚;张奕 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-06-10 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种乳腺上皮类器官模型构建方法，包括以下步骤：(1)获取乳腺腺体组织，剪碎后进行消化、解离获得细胞悬液，使用红细胞裂解液裂解红细胞，然后分离成纤维细胞和上皮细胞；(2)分别对分离的成纤维细胞和上皮细胞进行培养；(3)将步骤(2)所得上皮细胞和成纤维细胞进行共培养，上皮细胞和成纤维细胞的数量比例为1∶0.2～5。本发明方法相较于传统二维肿瘤细胞模型，能更好的模拟乳腺组织的组织学和遗传学特性，提高了基因组稳定性和药效预测敏感性和特异性；相较于患者来源的异种移植物动物模型，降低了研究周期，提高了造模成功率；相较于单纯的上皮类器官
一种乳腺上皮器官模型构建方法

[发明专利]肠上皮细胞的制造方法及其利用-CN202180044315.4在审
发明人：今仓悠贵;美马伸治;小椋泉;山崎奈穗 -专利权人：富士胶片株式会社
申请日： 2021-06-24 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明的课题在于提供一种通过对多能干细胞进行分化诱导而制造每单位面积的细胞数多且针对咪达唑仑等CYP3A4底物药剂的动态预测精度高的肠上皮细胞的方法以及上述肠上皮细胞、细胞片、被验物质的评价方法、被验物质的筛选试剂盒及细胞制剂根据本发明，提供肠上皮细胞的制造方法，其包括：第一分化工序，使多能干细胞分化为肠干细胞；增殖工序，使分化工序中所得到的肠干细胞增殖；及第二分化工序，使增殖工序中所得到的肠干细胞分化为肠上皮细胞，其中，增殖工序为使肠干细胞成为特定的状态的工序
上皮细胞制造方法及其利用

[发明专利]一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法-CN201710363364.X有效
发明人：欧阳克蕙;彭志鹏;王文君;瞿明仁;许兰娇 -专利权人：江西农业大学
申请日： 2017-05-22 - 公布日： 2020-07-10 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法。本发明对瘤胃上皮细胞分离培养进行改进，通过此方法能有效获得活力高、贴壁早、生长快的瘤胃上皮细胞。普通消化分离方法所得的细胞接种后3～6 d开始贴壁，8～10 d完成铺层，而通过所述的消化分离方法所得的细胞在12～24 h开始贴壁，2～3 d完成铺层。
一种绵羊瘤胃上皮细胞分离培养方法

[发明专利]一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法-CN201610112297.X在审
发明人：高明清;张涌;张文耀;和桂良;陈青;徐彤 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2016-02-29 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法：将泌乳期奶牛的乳腺组织剪切成组织块后用胶原酶/透明质酸酶消化液消化，将消化后呈乳糜状的组织块接种在培养皿进行培养，1～2天后组织块周围即有细胞游离出组织并贴壁生长，之后培养期间，每天采用机械刮除法去除梭形样成纤维细胞，直至大约4～5天后大量铺路石样乳腺上皮细胞成簇成片生长并互相融合时进行首次传代。首次传代时利用差速消化法使用胰蛋白酶消除可能混杂的极少量成纤细胞，即得到纯度很高的奶牛乳腺上皮细胞。本方法中乳腺上皮细胞可以在短时间从乳糜状组织中迁出；并且主要采用机械刮除法去除少量混杂的成纤维细胞污染，因此获得的乳腺上皮细胞损伤小、纯度高。
一种奶牛乳腺上皮细胞分离培养方法

[发明专利]穿心莲黄酮苷C在制备防治Covid-19药物中的用途-CN202111306995.0在审
发明人：姚宏;林钻;谢容芳;李少光;陈冰;吴尤佳 -专利权人：福建医科大学
申请日： 2021-11-05 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： A61K31/7048 文献下载
摘要：本发明分别采用BEAS‑2B人正常肺上皮细胞、NIH‑3T3小鼠胚胎细胞模型及分子对接技术、分子动力学模拟，证明了穿心莲黄酮苷C对人正常肺上皮细胞、小鼠胚胎细胞无显著毒性，而对人正常肺上皮细胞上的血管紧张素酶穿心莲黄酮苷C可结合人肺上皮细胞ACE2，阻断SARS‑CoV‑2与ACE2的结合，进而抑制SARS‑CoV‑2依赖与ACE2结合进入细胞的入侵途径，发挥防治Covid‑19的作用。通过研究穿心莲黄酮苷C的细胞毒性及对人肺上皮细胞ACE2的亲和力与抑制活性，为防治Covid‑19药物的研发和生产提供新的思路和方案。
穿心莲黄酮制备防治 covid 19 药物中的用途

[发明专利]从人羊膜上皮细胞中诱导分化出多巴胺能神经元的方法及分离所得神经元的用途-CN200910079088.X无效
发明人：蔡哲 -专利权人：中日友好医院
申请日： 2009-03-05 - 公布日： 2010-09-08 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明涉及从人羊膜上皮细胞中诱导分化出多巴胺能神经元的方法，该方法包括以下步骤：取新鲜人胎盘，将人羊膜剥离，用生理盐水反复冲洗除后，用无菌D-hank’s液浸泡，再用生理盐水漂洗；将人羊膜置于0.25％胰蛋白酶溶液中，在36.5℃-37.5℃温度下消化；用含有10％胎牛血清的DMEM/F12终止上述人羊膜在胰蛋白酶溶液中的消化，然后用细胞筛对上述溶液进行过滤，收集得到的细胞为人羊膜上皮细胞；分离所获得的人羊膜上皮细胞，用10％无胎牛血清的培养基对分离出来的上述人羊膜上皮细胞进行体外传代培养；选择生长状态良好的3或4或5或6代人羊膜上皮细胞，然后用神经干细胞分化培养基继续培养；收获上述多巴胺能神经元样细胞。
羊膜上皮细胞诱导分化多巴胺神经元方法分离所得用途

[发明专利]烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其前体物质在制备治疗角膜上皮缺损的药物中的应用-CN201910096789.8有效
发明人：李雅;周庆军;史伟云;李晶;马修彬;杨玲玲 -专利权人：山东省眼科研究所
申请日： 2019-01-31 - 公布日： 2021-05-18 - 主分类号： A61K31/7084 文献下载
摘要：本发明提供烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其前体物质在制备治疗角膜上皮缺损的药物中的应用，涉及眼部药物技术领域。本发明研究表明，角膜损伤后上皮细胞中的烟酰胺磷酸转移酶表达出现异常，导致角膜上皮细胞中烟酰胺嘌呤二核苷酸水平降低，而烟酰胺磷酸二核苷酸能够促进角膜上皮细胞修复，因而本发明通过在眼局部施用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其前体物质能够有效加速角膜上皮细胞的修复，有效治疗角膜上皮缺损。本发明以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其前体物质应用于制备治疗角膜上皮缺损的药物，具有广阔的开发与应用前景。
烟酰胺腺嘌呤核苷酸物质制备治疗角膜上皮缺损药物中的应用

[发明专利]一种无血清口腔黏膜上皮细胞培养液及应用-CN201810373958.3有效
发明人：吴训伟;邢志青;李霄;王红丽;张平;张甜甜;王杰 -专利权人：济南磐升生物技术有限公司
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种无血清口腔黏膜上皮细胞培养液及应用，本发明的培养液包括基础培养液(F12，无钙DMEM，K‑SFM)、必须补充因子、细胞生长因子、细胞增殖分化的调节因子等。本发明无血清的培养液，通过添加各种细胞增殖分化调节因子及其他成分，尤其是骨形态发生蛋白(BMP‑4)，既满足口腔黏膜上皮细胞的高密度增殖的需要，同时又避免了上皮细胞过度分化而导致的细胞增殖抑制现象，从而能有效的平衡体外口腔黏膜上皮细胞的增殖及分化速度，降低细胞的倍增时间，满足大规模的组织工程模型构建的需求。
一种血清口腔黏膜上皮细胞培养液应用

[发明专利]一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法-CN202310506553.3在审
发明人：黄莹之;孟菲;陈应炉;梅寒 -专利权人：宁波希诺赛生物科技有限公司
申请日： 2023-05-08 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒及方法。本发明的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒包括用于检测CD324和CD49d的试剂。本发明的区分羊膜间充质干细胞和上皮细胞的试剂盒可以准确鉴定体外分离培养后hAMSCs的纯度，这对羊膜体外分离培养hAMSCs具有重要意义。
一种区分羊膜间充质干细胞上皮细胞试剂盒方法

[发明专利]一种人子宫颈上皮细胞分离与培养方法-CN201910249584.9在审
发明人：张晓南;吴芳春;吴刘兵;陈虎;张斌;侍晓云 -专利权人：北京昱龙摩尔国际生物医学研究院
申请日： 2019-03-29 - 公布日： 2019-07-05 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种人子宫颈上皮细胞分离与培养方法，采集的活检样本置于特制的保存液中进行保存，可以有效保持细胞生理活性和增殖能力；原代培养基中加入细胞生长因子，可以有效提高细胞活性、促进细胞生长，从而获得优质的原代细胞；传代培养基中添加的尿囊素、肌酸和牡荆素可以有效提高细胞活力和分裂能力，从而促进细胞生长和增殖；将3T3细胞作为滋养层，可以为原代宫颈上皮细胞提供良好的生长基底，有效促进宫颈上皮细胞的生长分裂，从而大大提高培养效果通过上述方法，可以显著提高宫颈上皮细胞的活性和增值速率，从而为相关研究项目提供优质的实验材料。
宫颈上皮细胞上皮细胞细胞生长子宫颈传代细胞生长因子原代培养基分裂能力活检样本实验材料细胞活力细胞活性细胞生理项目提供有效促进原代细胞增殖能力培养基保存液牡荆素尿囊素生长基滋养层肌酸增殖采集保存分裂生长研究

[发明专利]呕吐毒素诱导猪小肠上皮细胞程序性坏死模型的建立方法-CN201810536705.3有效
发明人：刘玉兰;康萍;秦琴;王树辉 -专利权人：武汉轻工大学
申请日： 2018-06-01 - 公布日： 2021-11-02 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种呕吐毒素诱导猪小肠上皮细胞程序性坏死模型的建立方法，包括以下步骤：配制细胞培养液；将猪小肠上皮细胞接种至细胞培养液中培养，获得待诱导细胞；向待诱导细胞中加入含有呕吐毒素的细胞培养液，进行呕吐毒素诱导，获得经过呕吐毒素诱导处理后的诱导处理细胞；测定所述诱导处理细胞的细胞活力、乳酸脱氢酶活力、claudin‑1蛋白表达以及程序性坏死关键基因的mRNA表达及其蛋白表达，判断呕吐毒素诱导对猪小肠上皮细胞程序性坏死的作用本发明以呕吐毒素为诱导剂，成功建立猪小肠上皮细胞程序性坏死模型，具有操作简便、结果可靠、重复性好的优点。
呕吐毒素诱导小肠上皮细胞程序性坏死模型建立方法