[发明专利]一种人肿瘤坏死因子α衍生物及其制备方法无效
申请号: | 94112172.0 | 申请日: | 1994-05-19 |
公开(公告)号: | CN1100464A | 公开(公告)日: | 1995-03-22 |
发明(设计)人: | 赵寿元;李昌本;蔡武城;常金丽 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | C12N15/28 | 分类号: | C12N15/28;A61K37/66 |
代理公司: | 复旦大学专利事务所 | 代理人: | 姚静芳 |
地址: | 20043*** | 国省代码: | 上海;31 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 一种人肿瘤坏死因子α衍生物a及其制备方法。人肿瘤坏死因子α即hTNFα来源于人体内,难以获得足够数量的天然来源TNF供临床使用,基因工程的hTNFα其价格也十分昂贵,并有较大毒副反应,影响疗效。本发明的hTNFαDa是以hTNFα为原型进行结构改造而获得的基因工程产物。原型hTNFα基因是从人基因文库中与淋巴毒素基因同时克隆的。将该基因的第4外显子切出一部分与人工合成的寡聚核苷酸连接成hTNFαcDNA,设计PCR引物,以hTNFαcDNA为模板体外扩增获hTNFαDacDNA转入大肠杆菌中表达。本发明的hTNFαDa,制备方法和成本合理,表达高效,产品高效低毒。 | ||
搜索关键词: | 一种 肿瘤 坏死 因子 衍生物 及其 制备 方法 | ||
【主权项】:
1、一种人肿瘤坏死因子α衍生物a(hTNFαDa)的抗肿瘤药,是改变人肿瘤坏死因子α一级结构得到的一种药物,与人肿瘤坏死因子hTNFα比较,hTNFαDa的特征在于:(1)N端缺失7个氨基酸;(2)C端第8、9、10位氨基酸由原来的Pro-Ser-Asp改为Arg-Lys-Arg;(3)第157位氨基酸由原来的Leu改为Phe;(4)hTNFαDa共150个氨基酸。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于复旦大学,未经复旦大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/94112172.0/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 曼氏无针乌贼TNF基因及其用途-201910753116.5
- 刘慧慧;霍利平;葛德隆 - 浙江海洋大学
- 2019-08-15 - 2023-01-03 - C12N15/28
- 本发明提供一种曼氏无针乌贼TNF基因及其用途,属于基因工程技术领域,曼氏无针乌贼TNF基因具有SEQ ID NO:1的碱基序列,该基因编码的TNF蛋白具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。本发明曼氏无针乌贼TNF基因在曼氏无针乌贼脾脏、胰腺、腮、心脏、脑、视叶、肝脏和肠等8种组织中的都有表达,其在肝脏中的表达量最高;该基因对嗜水气单胞菌或副溶血性弧菌感染后的识别较为敏感且反应迅速;该基因的表达载体和编码的蛋白质为曼氏无针乌贼用免疫增强剂,能够提高曼氏无针乌贼的免疫力,尤其是提高曼氏无针乌贼对嗜水气单胞菌或副溶血性弧菌的免疫力。
- 同时表达十二聚体TRAIL及HSV-TK自杀基因的载体及利用其的抗癌干细胞治疗剂-201610351612.4
- 成永喆;金世原;金秀珍;朴常勋 - 浦项工科大学校产学协力团;株式会社拜德
- 2013-02-01 - 2016-09-21 - C12N15/28
- 本发明涉及包含编码十二聚体TRAIL的核苷酸序列及自杀基因核苷酸序列的DNA盒、包含所述DNA盒的重组表达载体、利用所述重组表达载体制备的重组腺病毒、用所述重组腺病毒转染的宿主细胞、包含所述宿主细胞的癌治疗用组合物以及包括向个体给予所述癌治疗用组合物的步骤的癌治疗方法。通过导入本发明的DNA盒从而同时生产十二聚体TRAIL及HSV‑TK的干细胞治疗剂与现有治疗剂相比抗癌效果更加优异,因此能够有效地用于治疗多种实体癌及转移癌。
- 一种高纯度重组人BAFF的制备方法-201310198851.7
- 崔县伟;季晨博;付子毅;郭锡熔 - 南京市妇幼保健院
- 2013-05-24 - 2013-09-04 - C12N15/28
- 发明公开了一种高纯度重组人BAFF的制备方法,该方法通过对人BAFF基因进行密码子优化后转入原核细胞,经诱导表达可获得大量人BAFF蛋白,并经过不同浓度梯度的尿素逐步变性、复性,获得高纯度的终产品。本发明设计巧妙,舍弃了传统的亲和层析纯化的方法,得到高表达、高纯度、具有生物学活性的重组人BAFF,进而可以作为抗原用于BAFF抗体的制备,同时又可作为免疫时的佐剂,以增强人的免疫反应,提高抗体的滴度,适于大规模推广应用。
- 非洲爪蛙增殖诱导配体TNFSF13基因和蛋白质制备及应用-201310014635.2
- 张双全;刘霞 - 南京师范大学
- 2013-01-15 - 2013-04-03 - C12N15/28
- 本发明涉及非洲爪蟾B淋巴细胞增殖诱导配体TNFSF13基因和蛋白质制备及应用。非洲爪蟾增值诱导配体cDNA具有SEQ ID NO.1所示的序列。其克隆方法如下:提取脾脏总RNA并进行逆转录;设计引物扩增该基因的中间片段,然后根据中间片段再分别设计引物扩增3’和5’末端序列,测序正确后进行序列拼接,得到全长cDNA序列。将胞外可溶段连接到SUMO原核质粒中并转到大肠杆菌Rosseta(DE3)中表达,Ni+-NTA柱纯化后得到的重组蛋白His6-XsAPRIL。所述的非洲爪蟾B淋巴细胞增殖诱导配体TNFSF13(APRIL)的cDNA可通过现有基因工程的方法,生产重组蛋白,用于进一步的研究。
- 一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因、蛋白及其抗体的制备方法-201210480470.3
- 杨受保 - 绍兴文理学院
- 2012-11-23 - 2013-03-13 - C12N15/28
- 本发明公开了一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因,具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列;一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白质,具有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列;及其抗体的制备。通过本发明得到三角帆蚌sTRAIL蛋白抗体产品,有助于新型抗肿瘤药物的研制与开发。
- 狗肿瘤坏死因子14基因和蛋白质制备及应用-201210358764.9
- 张双全;刘霞 - 南京师范大学
- 2012-09-25 - 2013-01-09 - C12N15/28
- 狗肿瘤坏死因子14(TNFSF14/LIGHT)基因和蛋白质制备及应用,涉及生物基因工程领域。狗肿瘤坏死因子14具有SEQIDNO.1所示的序列。其克隆方法如下:TRIzol法提取狗脾脏总RNA并进行逆转录;根据狗基因组序列设计嵌套引物进行两次PCR扩增,获得723bp的扩增片段,经测序为狗肿瘤坏死因子LIGHT的全长序列。将胞外可溶段连接到pET43.1a原核质粒中并转到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni+-NTA柱纯化后得到的重组蛋白His6-dsLIGHT。所述的狗肿瘤坏死因子14(LIGHT)的cDNA可通过现有基因工程的方法,生产重组dLIGHT,用于进一步的研究。
- 青石斑鱼B淋巴细胞刺激因子基因与蛋白质的制备及应用-201210332686.5
- 张双全;田爱英 - 南京师范大学
- 2012-09-10 - 2012-12-12 - C12N15/28
- 青石斑鱼B淋巴细胞刺激因子(BAFF)基因与蛋白制备技术,涉及青石斑鱼BAFF基因克隆、表达、蛋白纯化及活性鉴定技术。通过RT-PCR和RACE技术我们得到了青石斑鱼B淋巴细胞刺激因子的全长cDNA。它具有SEQIDNO.1所示的序列,该基因CDS开放阅读框碥码的蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。将胞外功能区可溶段连接到pET28a原核质粒中并转到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni+-NTA柱纯化后得到的重组蛋白His6-EasBAFF,实验证明该融合蛋白能够明显促进青石斑鱼淋巴细胞以及小鼠B淋巴细胞的存活。
- 治疗和/或预防病毒感染的产品及方法-201110126289.8
- 傅阳心 - 傅阳心
- 2011-05-17 - 2012-11-21 - C12N15/28
- 本发明涉及病毒感染的预防和/或治疗领域,特别是对由病毒感染引起的疾病,例如肝炎的预防和/或治疗。本发明涉及利用LIGHT多肽,或者编码所述LIGHT多肽的多核苷酸在肝内预防和/或治疗由病毒感染引起的疾病或病况。本发明还涉及LIGHT多肽、病毒抗原、和/或所述病毒抗原的高亲和性中和抗体的组合,及其预防和/或治疗病毒感染的用途和方法。
- 斑马鱼肿瘤坏死因子14的基因及其克隆方法和重组应用-201210178793.7
- 张双全;田爱英 - 南京师范大学
- 2012-06-02 - 2012-09-19 - C12N15/28
- 斑马鱼肿瘤坏死因子14(TNFSF14/LIGHT)cDNA及其克隆方法和重组应用,涉及生物基因工程领域。所述斑马鱼LIGHTcDNA的序列如SEQIDNO.1所示。其克隆方法如下:提取斑马鱼脾脏总RNA并进行逆转录;设计兼并引物进行PCR扩增,获得708bp的全长斑马鱼LIGHTcDNA。斑马鱼LIGHT的cDNA可通过现有基因工程的方法,将该基因的胞外功能区克隆连到pETSUMO质粒中并转到大肠杆菌BL21(DE3)中原核表达,得到斑马鱼SUMO-zsLIGHT融合蛋白。重组LIGHT蛋白可开发成预防和治疗鱼类免疫疾病的免疫增强剂和免疫佐剂。
- 原核表达并纯化人来源的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的简便化工业技术-201110274340.X
- 柴笑梅;朱月珍;杨宣武;江永海 - 江苏普罗赛生物技术有限公司
- 2011-09-16 - 2012-03-07 - C12N15/28
- 本发明涉及原核表达并纯化人来源的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的简便化方法。本发明的目的在于实现人来源的TNF-α在原核细胞中的大量表达,并通过简化的纯化步骤,获得纯度较高的目的蛋白。在工业生产中满足生产周期短,生产成本低,产量高的总体要求。
- 一种可溶性突变BAFF蛋白及其编码基因与应用-201110096773.0
- 赵跃然;陈子江;焦玉莲;马金龙 - 赵跃然;陈子江
- 2011-04-18 - 2011-11-23 - C12N15/28
- 本发明涉及一种可溶性突变BAFF蛋白及其编码基因与应用,属于生物技术技术领域。本发明所述的可溶性突变BAFF蛋白,氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,编码该可溶性突变BAFF蛋白的基因,核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明所述的突变的smBAFF保留结合BAFF受体能力而丧失活化受体的能力,因而不刺激B细胞增殖活化,作为B细胞靶向载体更为安全;编码smBAFF的基因,非常适合在大肠杆菌中表达,同时通过发酵与纯化工艺优化,提高表达量,具有高表达、高稳定的优点。本发明获得保留受体结合活性而缺失受体活化活性的人BAFF突变体-smBAFF,并可高效、简便、低成本的制备重组人smBAFF。
- 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体编码cDNA及制备方法和应用-200510021996.5
- 陈守春;陈毅荣;徐琦;刘玉应;高小平;刘忠荣;李伯刚 - 成都地奥制药集团有限公司
- 2005-11-03 - 2007-05-09 - C12N15/28
- 本发明在现有技术的基础上,提供了重新设计的重组人TRAIL突变体多肽编码cDNA。将本发明重组人TRAIL突变体多肽编码cDNA构建成表达载体并转入常用的宿主细胞尤其是原核细胞中制备重组人TRAIL突变体多肽时,在比现有技术获得更高的表达效率的同时还能提高可溶性表达的比例,制备得到的重组人TRAIL突变体多肽的活性也大大高于现有技术。本发明克服了现有技术产率低、生产成本高、产品活性弱的缺点,能大大降低人TRAIL突变体多肽的使用成本,实现其产业化生产,促进其在基础研究和医药生产上的应用。
- 一种人肿瘤坏死因子TNF-α突变体的生产方法-200510026652.3
- 孙九如;任军;黄阳滨;丰涛;蒋剑 - 上海新生源医药研究有限公司
- 2005-06-10 - 2006-12-13 - C12N15/28
- 本发明提供了一种人肿瘤坏死因子TNF-α突变体的生产方法,以及有关的表达载体与工程细胞构建、表达和纯化的工艺。优化后的人肿瘤坏死因子TNF-α突变体蛋白基因非常适合在毕赤酵母中表达,同时通过发酵与纯化工艺优化,提高了表达量和纯化得率,具有表达高、稳定性好,生产工艺简便的优点。本发明可高效、简便、低成本的获得人肿瘤坏死因子TNF-α突变体。
- 黑鲷肿瘤坏死因子α基因的重组表达方法-200410050331.2
- 宋林生;蔡中华;高春萍;相建海 - 中国科学院海洋研究所
- 2004-08-27 - 2006-03-01 - C12N15/28
- 本发明涉及分子生物学技术领域,是黑鲷肿瘤坏死因子α(BS TNFα)基因的体外表达与纯化技术。本发明包括重组表达载体的构建、转化、转化子筛选和表达产物的分离纯化和鉴定等技术环节。其中重组体的构建是根据黑鲷肿瘤坏死因子α预测成熟肽的cDNA序列设计引物,引入两个不同的限制性内切酶突变位点,然后克隆到表达载体,再将构建成的重组表达载体转化大肠杆菌和酵母,筛选阳性克隆并以IPTG或甲醇诱导重组蛋白的表达。利用亲和层析对表达产物进行多级纯化,获得高纯度体外表达的重组肿瘤坏死因子α。该产品可用于鱼类免疫机制的理论研究,也可作为饵料添加剂、免疫增强剂、病害防治药物等在生产方面进行应用。
- 包含死亡结构域的受体-5-200410094917.9
- 倪健;R·L·根兹;余国良;J·Y·苏;C·A·罗森 - 人类基因组科学公司
- 1998-03-17 - 2005-06-08 -
- 本申请涉及新的包含死亡结构域的受体-5(DR5)蛋白质,该蛋白质是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员,并表现为能结合TRAIL。具体说,提供了编码人DR5蛋白质的分离的核酸分子。还提供了DR5多肽以及用于制备这种多肽的载体、宿主细胞和重组方法。本发明还涉及鉴定DR5活性激动剂和拮抗剂的筛选方法。
- 肿瘤坏死因子受体可溶部分的重组基因,及其融合基因与产物-01132074.5
- 马菁;徐身东 - 上海中信国健药业有限公司
- 2001-10-31 - 2003-05-14 -
- 本发明提供了一种重组sTNFR基因,其中的密码子符合哺乳动物细胞使用密码子的偏爱性。本发明还提供一种包含该重组基因的融合基因。当本发明的基因或融合基因表达时,其在CHO细胞中的表达量提高了近5倍,所得融合蛋白的亲和力提高了一个数量级。
- 新型重组人肿瘤坏死因子衍生物及其制法-95113311.X
- 焦炳华;娄永华;余伟民;周炳荣;王梁华 - 中国人民解放军第二军医大学
- 1995-10-20 - 2000-10-04 -
- 本发明提供了一种人肿瘤坏死因子α衍生物,在人肿瘤坏死因子α衍生物的氨基酸序列中至少在80,90和92中任何一位或二位或三位有变化。更佳地在人肿瘤坏死因子α衍生物的氨基酸序列中80位为丝氨酸和/或90位为组氨酸和/或92位为缬氨酸,最佳地80位为丝氨酸、90位为组氨酸和92位为缬氨酸。本发明还提供含有该衍生物的药物组合物。此外本发明还提供了该衍生物的制备方法及有关的DNA序列、表达载体和宿主细胞。
- 新型人肿瘤坏死因子突变体-96118830.8
- 张英起;王增禄;赵宁 - 中国人民解放军第四军医大学
- 1996-11-19 - 1998-05-27 -
- 新型人肿瘤坏死因子突变体,涉及基因工程技术,应用PCR技术将人肿瘤坏死因子基因中编码氨基末端的7个氨基酸序列缺失,将编码Pro8Ser9Asp10序列用编码ArglysArg序列取代,同时将Leu157用Phe取代,构建了一种新型人TMP突变体基因,将此突变基因插入大肠杆菌表达载体pBV220,通过温度诱导获得了高效表达。此突变体提高了其抗肿瘤活性,降低其毒副作用将会使人TMF的临床应用成为可能。
- 一种重组人肿瘤坏死因子衍生物及其制备方法-95115489.3
- 刘丽;王国志;谢宝树;冯彪;冷爱军 - 中国人民解放军空军总医院
- 1995-09-18 - 1996-07-31 -
- 本发明公开了一种重组人肿瘤坏死因子α衍生物及其制备方法。本发明将原型TNFα分子的第1-7位氨基酸缺失掉,并将第8、9、10、157位的氨基酸置换为ArgLusArg和Phe,所制得的衍生物比活性比原型高720倍,毒性低约100倍,可广泛用于治疗各种恶性肿瘤,如肝癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、黑色素瘤、皮肤癌、胃癌和食道癌等。
- 改良型人肿瘤坏死因子的基因及其生产工艺-94111496.1
- 徐贤秀 - 南京大学
- 1994-11-09 - 1996-05-29 -
- 本发明属于基因工程生产多肽药物领域,用于治疗恶性肿瘤。本发明所述改良型TNF为删除TNF第三、四位的丝氨酸和第七、八位的苏氨酸、脯氨酸,将第五位的丝氨酸改为赖氨酸,由153个氨基酸组成的TNF变体蛋白。改良后的TNF基因在大肠杆菌中高效表达并分离纯化成单一组分纯品,比活为3-8×107u/mg,比天然TNF比活高3-5倍,毒性也相应降低,基因表达水平比天然TNF表达水平高一倍,由24%增加至50%左右,因此,分离纯化工艺简单,得率高,成本低,适宜大规模生产。
- 一种人肿瘤坏死因子α衍生物及其制备方法-94112172.0
- 赵寿元;李昌本;蔡武城;常金丽 - 复旦大学
- 1994-05-19 - 1995-03-22 -
- 一种人肿瘤坏死因子α衍生物a及其制备方法。人肿瘤坏死因子α即hTNFα来源于人体内,难以获得足够数量的天然来源TNF供临床使用,基因工程的hTNFα其价格也十分昂贵,并有较大毒副反应,影响疗效。本发明的hTNFαDa是以hTNFα为原型进行结构改造而获得的基因工程产物。原型hTNFα基因是从人基因文库中与淋巴毒素基因同时克隆的。将该基因的第4外显子切出一部分与人工合成的寡聚核苷酸连接成hTNFαcDNA,设计PCR引物,以hTNFαcDNA为模板体外扩增获hTNFαDacDNA转入大肠杆菌中表达。本发明的hTNFαDa,制备方法和成本合理,表达高效,产品高效低毒。
- 纯化具有人生理活性的多肽的方法-86104077.5
- 梶原淳一;清田隆夫;林纮 - 旭化成工业株式会社
- 1986-05-20 - 1992-06-10 -
- 含有生理活性多肽的水溶液,它是用重组DNA技术生产的,对L-M细胞有细胞毒素活性,能引起在BALB/C小鼠中植入的MethA肉瘤出血性坏死,通过用以染料结合的交联琼脂糖凝胶装的柱的柱层析就能被有效地纯化,本发明的纯化人生理活性多肽己被发现引起肿瘤坏死效果卓著而对活体的正常组织无毒害影响。
- 专利分类