[发明专利]一种致病性霍乱弧菌的快速检测方法在审
| 申请号： | 201911055118.3 | 申请日： | 2019-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN110607354A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 卢瑛;方微微;蔡杨杨 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 31293 上海唯智赢专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 卫瑞;吴瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种致病性霍乱弧菌的快速检测方法。本发明首先提供了一种检测致病性霍乱弧菌的引物和探针。所述引物和探针具有高灵敏性和特异性。本发明还提供一种致病性霍乱弧菌的快速检测方法，采用特异性引物和探针，利用重组酶介导等温核酸扩增结合侧向层析技术，实现了致病性霍乱弧菌的快速、灵敏、特异性检测，且操作简便、耗时短，解决了传统检测技术耗时长、步骤繁琐等问题。本发明技术不需要特殊的仪器设备，降低了检测成本，扩大了该技术的应用范围，可应用于野外现场等特殊环境，对霍乱弧菌的早期检测与诊断具有重大意义。 | ||
| 搜索关键词： | 致病性霍乱弧菌 探针 快速检测 引物 耗时 传统检测技术 等温核酸扩增 特异性检测 特异性引物 侧向层析 霍乱弧菌 野外现场 仪器设备 早期检测 重大意义 灵敏性 种检测 重组酶 介导 灵敏 应用 诊断 检测 | ||
【主权项】：
1.一种检测致病性霍乱弧菌的引物和探针，其特征在于，所述引物序列信息如下：/n正向引物F-RAA：5′-AGTCAGGTGGTCTTATGCCAAGAGGACAGAG-3′；/n反向引物R-RAA：5′-TGGAAACATATCCATCATCGTGCCTAACAAA-3′；/n所述探针序列信息如下：/n5′-GTCAGGTGGTCTTATGCCAAGAGGACAGAGGAGACTTTGACCGAGGTA-3′。/n
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- 2018-05-20 - 2019-11-26 - C12Q1/6844
- 本发明的目的是提供1套基于RPA技术检测南方根结线的引物和探针，其中1对引物如SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示，探针序列如SEQ ID No:9所示。利用本发明的引物和探针进行RPA反应和侧向流试纸条快速检测，可以摆脱传统分子检测对PCR仪等昂贵仪器和严格反应条件的限制，快速、高效鉴定南方根结线虫，结果肉眼即可观察，在南方根结线虫的早期和田间诊断、辅助鉴定方面有很高的应用价值。
- 一种快速鉴别日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫的LF-RPA方法及其应用-201910883465.9
- 朱传刚;纪荣毅;沈元曦;周志平;冒丽;刘冀 - 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心);尼沃诺斯(苏州)生物工程有限公司
- 2019-09-19 - 2019-11-26 - C12Q1/6844
- 本发明公开了一种快速鉴别日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫的LF‑RPA方法及其应用；还公开了快速检测试剂盒及检测方法。本发明的有益效果为：本发明提供的用于检测日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫的引物对和探针及快速检测试剂盒，是建立在分子生物学基础上的，该引物和探针能够特异性的扩增日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫，提供的快速检测日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫核酸的试剂盒，敏感性高于PCR，特异性强，检测速度快，结果的判定操作极其简便；本发明提供检测方法和检测试剂盒，结合已有的核酸快速提取方法，能够达到快速鉴定、检测日本血吸虫，曼式血吸虫，东毕吸虫的目的。
- 基于双环发夹探针以及酶介导的级联扩增策略检测博来霉素的方法-201610438020.6
- 王磊;姜玮;王慧娟 - 山东大学
- 2016-06-17 - 2019-11-22 - C12Q1/6844
- 本发明公开了一种基于双环发夹探针以及酶介导的级联扩增策略检测博来霉素的试剂盒及其检测方法。通过双环发夹探针能够有效沉默触发序列，抑制非特异性杂交进而降低检测方法的背景信号；酶介导的级联扩增反应能够实现对检测信号的多重放大，从而提高检测方法的灵敏度，实现了对博来霉素的高灵敏检测，线性范围40pM‑10nM，检测限为35pM。灵敏度较之前建立的免标记荧光检测方法提高了近两个数量级，能够满足临床样品检测的需求。
- 七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法及应用-201810430174.X
- 蒋兴宇;钱伟 - 国家纳米科学中心
- 2018-05-08 - 2019-11-15 - C12Q1/6844
- 本发明提供了一种七管道芯片检测肠道致病菌沙门氏菌的方法和应用，包括用于检测肠道致病菌沙门氏菌的特异的重组酶聚合酶引物，探针及七管道芯片，其中正向引物的序列为SEQ ID No:1，反向引物的序列为SEQ ID No:2，探针对应的序列为SEQ ID No:3，七管道芯片以高聚物为材料，通过微加工方法制备。七管道芯片包含七个有序排列的微米通道，能够实现多重信号的区分以及防止多个体系之间的交叉污染。本发明提供一种基于微流控芯片的快速检测肠道致病菌沙门氏菌的方法，以实现对沙门氏菌的快速，安全，特异，简单的现场检测。本发明同时提供了多样品同时检测的可能性，为防止沙门氏菌疫情的发生，保障食品安全提供了有效方案。
- 基于重组酶扩增和G-四连体的层出镰刀菌目视检测方法-201910451936.9
- 王莹;时鹏飞 - 临沂大学
- 2019-05-28 - 2019-11-15 - C12Q1/6844
- 本发明公开了一种基于重组酶扩增和G‑四连体DNAzyme的层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)目视检测方法，包括以下步骤：(1)以NaOH溶液裂解待测样品细胞壁结构，得到基因组DNA粗提液；(2)根据目的基因设计用于进行RPA反应的特异性引物1和引物2；(3)以粗提液中的基因组DNA为模板进行不对称RPA反应，反应得到带有G‑四连体序列的单链和双链DNA扩增产物；(4)在含有扩增产物的溶液中加入hemin和NH4+，孵育1小时，单链DNA3′‑末端折叠成具有G‑四连体结构的DNAzyme；(5)最后向含有该酶的溶液中加入一定浓度的ABTS和H2O2，二十分钟后观察颜色是否变化，显色为绿色的样品为阳性，不显色则样品为阴性。
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