[发明专利]一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法在审
| 申请号： | 201910440068.4 | 申请日： | 2019-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN110106235A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 陈谦;刘弘扬;刘泓;贾海雪 | 申请（专利权）人： | 苏州索真生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 215163 江苏省苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法，包括以下步骤：采集孕妇血浆样本并分离出游离DNA；用去离子水洗脱游离DNA，形成待测染色体；将正常女性基因组DNA剪切成200bp的片段DNA，形成参照染色体；对待测染色体及参照染色体进行定量标记，形成靶标区域；在靶标区域内选择目标序列设计引物和探针；选择具有相同探针的引物对目标序列中潜在的二级结构进行筛选，形成靶向区域；通过PCR反应体系对靶向区域进行PCR扩增和结果定量分析；确定靶向区域中DNA分子的拷贝数；判断孕妇血浆样本中胎儿是否存在非整倍体染色体。有益效果：在保证准确率的同时，降低设备门槛。 | ||
| 搜索关键词： | 染色体 非整倍体 胎儿染色体 靶向区域 孕妇血浆 游离DNA 靶标 筛查 探针 微滴 无创 样本 序列设计引物 基因组DNA 定量分析 定量标记 二级结构 降低设备 目标序列 选择目标 正常女性 剪切 拷贝数 潜在的 水洗脱 准确率 对靶 引物 胎儿 离子 采集 门槛 筛选 保证 | ||
【主权项】：
1.一种基于数字微滴PCR无创产前胎儿染色体非整倍体筛查方法，其特征在于，包括以下步骤：采集孕妇血浆样本，并从中分离出游离DNA；采用预先准备好的去离子水洗脱所述游离DNA，形成待测染色体，并放置在‑80℃下保存备用；将预先制备的正常女性基因组DNA剪切成200bp的片段DNA，形成参照染色体；使用荧光计对所述待测染色体及所述参照染色体进行定量标记，形成靶标区域；在所述靶标区域内选择目标序列设计引物和探针；选择具有相同探针的引物对所述目标序列中潜在的二级结构进行筛选，形成靶向区域；通过预先配置的PCR反应体系对靶向区域进行微滴式数字PCR扩增和结果定量分析；读取并分析每滴液滴中FAM和VIC荧光强度，确定所述靶向区域中DNA分子的拷贝数；根据所述靶向区域中DNA分子的拷贝数，判断孕妇血浆样本中胎儿是否存在非整倍体染色体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于苏州索真生物技术有限公司，未经苏州索真生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910440068.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 不同浓度α-MSH处理黑色素细胞后Gnαq基因表达特性的试验方法-201910841199.3
- 庞全海;梁睿;李振;白瑞;王天元;庞治华 - 山西农业大学
- 2019-09-06 - 2019-11-12 - C12Q1/6851
- 本发明公开了不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq基因表达特性的试验方法，步骤包括：黑色素细胞的分离与纯化；引物设计及合成；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后总RNA提取及鉴定；反转录与目的片段扩增；PCR扩增产物纯化与回收；Gnαq cDNA序列测定；重组质粒的转化；质粒DNA提取；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq mRNA qRT‑PCR检测；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq蛋白水平检测；数据处理与统计分析。本发明通过分离纯化绵羊黑色素细胞，不同浓度α‑MSH处理，Real time PCR检测和WB检测结果显示，不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后，Gnαq基因的表达量呈降低趋势，α‑MSH对于Gnαq基因的表达不具有促进作用。因此，本发明验证了Gnαq基因对于黑色素的调控和α‑MSH不属于同一信号通路有关，作用机制得到了证实。
- 一种前列腺癌PCA3基因双重实时PCR的引物、方法及试剂盒-201910622955.3
- 李志鹏;杨海涛 - 杨海涛
- 2019-07-11 - 2019-11-08 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种前列腺癌PCA3基因双重实时PCR的引物、方法及试剂盒，通过一个双重实时荧光PCR反应体系同时扩增PCA3和PSA基因，实现PCA3基因表达水平的相对定量。通过合理的引物设计，特异性的扩增前列腺癌特有的PCA3基因选择性剪切产物；通过引物筛选、镁离子浓度优化等，使目标基因PCA3和参照基因PSA的扩增效率均接近100％，符合比较Ct值进行准确定量的要求。本试剂盒适用于病理白片标本和尿液标本的PCA3基因定量检测，单管双探针并行检测，具有明显的低价、快速、简便且定量准确的优点，敏感性为66％、特异性为95％，有助于临床上前列腺癌症病人的早期诊断。
- 一种幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药检测方法-201910738245.7
- 陈红岩;王盛洲 - 复旦大学
- 2019-08-12 - 2019-11-08 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药检测方法，属于生物学检测技术领域。对左氧氟沙星耐药基因喹诺酮结合位点GyrA进行荧光定量PCR检测，通过检测反应体系中溶解过程释放的荧光信号曲线，根据杂交峰所显示的Tm值区分出敏感型和耐药型。本发明还提供了幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药耐药检测试剂盒。与现有技术相比，本发明通过检测反应体系中溶解过程释放的荧光信号曲线，根据杂交峰所显示的Tm值区分出敏感型和耐药型。本发明灵敏度和特异性高、操作简便、检测速度快，检测结果差异显著易于分型。
- 一种甲烷菌中高活性甲基辅酶M还原酶提取工艺-201910754234.8
- 周玉珍;宦海霞;汪伟;徐建明;唐玉玲 - 淮阴师范学院
- 2019-08-15 - 2019-11-08 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种甲烷菌中高活性甲基辅酶M还原酶提取工艺，包括如下步骤：S1、进行土壤和气体分析，培养甲烷菌；S2、检测单不饱和脂肪酸异戊烯基侧链的碳氢化合物表示的乙酸分解的存在；S3、从土壤中提取DNA；S4、实时定量PCR和克隆库的分析甲基辅酶M还原酶；S5、mcrA基因的克隆和测序后进行统计分析，本发明结构科学合理，使用安全方便，在提取前，对于甲烷菌进行培育，通过土壤下压，从而排出土壤中的空气，提高其无氧效果，让甲烷菌的产量与数量均可以得到保障，而通过10‑22度，是甲烷菌最适合繁殖的温度，从而提高了其自身繁殖速率，并且通过有机肥增加其繁殖的肥料，而在提取其DNA后进行分析，检测甲基辅酶M还原酶的活性。
- cfRNA的液体活检-201880018779.6
- 凯瑟琳·达南伯格;沙赫鲁兹·拉比扎德;约书亚·厄舍;约兰达·海梅斯 - 南托米克斯有限责任公司
- 2018-03-15 - 2019-11-08 - C12Q1/6851
- cfRNA用于鉴定和定量疾病相关基因的表达水平，并且进一步允许对此类基因的变化进行非侵入性监测。此外，疾病相关基因的定量分析将使得能够预测治疗反应，其中该治疗依赖于该疾病相关基因的存在。
- 一种端粒长度检测试剂盒与方法及生物学年龄评价方法-201910779141.0
- 张颖;聂苏秦;俞瑞卿;高思欣 - 陕西九州医学检验有限公司
- 2019-08-22 - 2019-11-05 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于端粒长度检测的试剂盒，包括：端粒基因引物序列，内参基因引物序列，本发明还公开了一种生物学年龄评价方法，步骤如下：(1)建立中国人口端粒长度检测校准T/S数据库；(2)依据上述端粒长度校准T/S值‑年龄模型分布图，拟合算法，建立端粒长度‑生物学年龄的算法模型系统；应用本发明试剂盒采用校准T/S比作为端粒长度评价标准，可实现端粒长度的准确检测及动态评价分析；应用本发明试剂盒可通过提供的生物学年龄数据库及计算模型系统，实现生物学年龄的科学评估；应用本发明试剂盒进行端粒长度检测效果稳定，原料廉价易得，实验操作简单、易行。
- 杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法及其应用-201611031012.6
- 李绍戊;刘帅;曹永生;贾钟贺;王荻;卢彤岩;王渊博;杨晨;朱国建 - 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
- 2016-11-17 - 2019-11-01 - C12Q1/6851
- 本发明公开了杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法。本发明以杀鲑气单胞菌fstA基因为靶基因，建立了杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法。通过实验证明：本发明的方法不仅具有特异性强、灵敏度高和重复性好的特点，还具有操作方便、鉴定快速和结果客观等优点，可用于杀鲑气单胞菌的快速诊断及定量检测，为鲑鳟鱼疖疮病的诊断及防控提供技术手段。
- 一种用于建立珊瑚游离和内寄生共生藻丰度以及珊瑚白化警示系数H的技术指标的方法-201610531787.3
- 林镇跃;陈建明;陈明谅 - 国家海洋局第三海洋研究所
- 2016-07-04 - 2019-10-29 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于建立珊瑚游离和内寄生共生藻丰度以及珊瑚白化警示系数H的技术指标的方法。方法为：珊瑚生长的海域海洋环境游离状态共生藻丰度指标建立、珊瑚体内寄生状态的共生藻丰度指标的建立、珊瑚白化警示系数H的建立。本发明所述方法可对各类海水野外样品和水族馆的实验样品采集的海水都可以准确测定，在时间和空间动态都能进行长期和短期的监测，具有广阔的应用前景。
- 一种用于制备微滴式数字PCR中液滴的油相组合物-201611088461.4
- 赵然;卢旖 - 领航基因科技（杭州）有限公司
- 2016-11-30 - 2019-10-29 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于制备微滴式数字PCR中液滴的油相组合物，包括主体成分和表面活性剂，所述主体成分为矿物油和烷烃，所述表面活性剂为EM90和TritonX‑100，其中，所述烷烃为12～16烷中的一种或混合。本发明油相组合物使用矿物油替代氟化油，具有非极性不溶于水、不易挥发、性质稳定、对PCR扩增无抑制作用、轻质油运动粘度较低等优点，同时，通过添加合适的烷烃来进一步降低运动粘度，再添加合适的表面活性剂EM90和TritonX‑100，最终，使用本发明油相组合物来制备液滴，所得液滴具有大小均一、热稳定性好、不易挥发、不易产生气泡、不抑制扩增等优点。
- 羊奶粉中牛奶成分的粗放与精准定量检测方法-201610363584.8
- 刘永峰;廖晶 - 陕西师范大学
- 2016-05-26 - 2019-10-25 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种羊奶粉中牛奶成分的粗放与精准定量检测方法，其是通过普通PCR对掺假模型进行分级，利用荧光定量PCR获得处于各个相应等级的Ct值与掺假比例的关系式，之后通过普通PCR确定待检样品的等级，然后对待检样品进行荧光定量PCR获取Ct值，代入到相应级别的关系方程中从而计算出羊奶粉中牛奶成分的百分含量，本发明将普通PCR与实时荧光定量PCR相结合，能够完成羊奶粉中牛奶成分的定性、粗放与精准定量检测，步步深入，成本逐渐增加，可用于不同层次的需求，其灵敏度更高、特异性更强，且检出限更低，本发明方法可推广用于所有动物粉制剂中的掺假检测，也可被其他动物性产品中动物源成分的检测作为借鉴。
- 一种基于PMA-qPCR技术的布鲁氏菌活菌计数方法-201910801583.0
- 任洪林;张士军;胡盼;卢士英;柳增善;王海波;李岩松;柳溪林;张英 - 吉林大学
- 2019-08-28 - 2019-10-18 - C12Q1/6851
- 本发明提供了一种基于PMA‑qPCR技术的布鲁氏菌活菌计数方法，属于微生物计数技术领域。本发明优化PMA处理布鲁氏菌S2的处理浓度与曝光时间，再结合qPCR方法检测布鲁氏菌BCSP31基因，建立PMA‑qPCR定量检测布鲁氏菌活菌的方法。采用PMA‑qPCR检测布鲁氏菌的灵敏度是普通PCR的100倍，可对布鲁氏菌活菌数进行准确定量，且PMA处理不对qPCR反应造成干扰。用PMA‑qPCR法计数布鲁氏菌活菌数具有快速、简便、特异性较好等特点。与平板技术方法相比，既可以快速完成布鲁氏菌活菌数测定，又可以同时完成布鲁氏菌的定量定性检测。
- 采用实时荧光定量PCR技术检测黔北麻羊CTSB基因组织表达谱的方法-201910794203.5
- 陈祥;周志楠;洪磊;敖叶;吴雨;唐文;韦仕南 - 贵州大学
- 2019-08-27 - 2019-10-15 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种采用实时荧光定量PCR技术检测黔北麻羊CTSB基因组织表达谱的方法。本发明具有操作简便、快速高效、敏感性高、特异性强、有效解决了PCR污染、PCR热不稳定的问题、自动化程度高等特点，比采用其它方法适应性更强、效果更好。且本发明简单易懂，便于操作。
- 一种筛查脊髓性肌萎缩症的方法及其应用-201910532265.9
- 朱琦 - 苏州市舒曼生物科技有限公司
- 2019-06-19 - 2019-10-11 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种筛查脊髓性肌萎缩症的方法及其应用。本发明方法的技术要点为包括以下步骤：S1：质控品的制备；S2：引物探针组合物的设计；S3：数字PCR反应；S4：实验结果判断。该方法的应用为，将该方法制备的质控品、引物、探针用于筛查脊髓性肌萎缩症。本发明由质控品、引物、探针以及数字PCR的共同作用，能够在价格与q‑PCR检测基本无异的情况下，覆盖较多检测区域，提高检测效率。
- 一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法-201910520627.2
- 李瑞利;吴思颉;沈小雪 - 北京大学深圳研究生院
- 2019-06-14 - 2019-10-01 - C12Q1/6851
- 本发明提供了一种红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，属于环境监测领域，其包括：红树林湿地现状调查；确定指示微生物；选定理想参照点；建立红树林沉积物样品采集方法，明确微生物分析方法，包括样品DNA提取方法、PCR扩增方法和克隆文库构建方法；选定指示微生物指标评价因子，以指示微生物基因拷贝数、多样性指数和优势菌群占比作为评价因子；确定微生物指标评价因子的权重Wi；计算微生物指标评价因子的评价比值Ii；计算评价指标P，划分评价等级，根据评价等级对红树林湿地沉积物健康状况进行评估。本发明提供的红树林湿地沉积物健康状况的微生物指标评估方法，可准确有效地评估野外条件下红树林湿地沉积物的健康状况，适用范围广。
- 一种检测发酵豆乳中复合益生菌比例的荧光定量PCR方法-201910556175.3
- 任大勇;孙畅;王玉华;安彬;杨柳;王国超;冯时荣;闫薇;周烁浛;吕慧娟 - 吉林农业大学
- 2019-06-25 - 2019-09-20 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种检测发酵豆乳中复合益生菌比例的荧光定量PCR方法，包括以下步骤：S1原料选取、S2扩增纯化、S3质检筛选、S4确定拷贝数、S5荧光测定、S6测定结果；本发明的有益效果是：通过特异性引物Lactobacillusplantarum‑R、Lactobacillusplantarum‑F与Lactobacillusparacasei‑F、Lactobacillusparacasei‑R，进而大量扩增出所需的两种目的基因；通过利用搭载不同目的基因的大肠杆菌显色不同，方便后期确定拷贝数；通过利用随着反应中双链DNA变性，荧光染料又恢复到游离状态导致荧光信号降低的这一特性，当达到特征峰温度时，特异产物与其它产物区分开，进而可以确定具体产物。
- 一种基于纤维素酶基因计算菌剂施加量的方法及其应用-201910569076.9
- 石振华;张琪;车建刚;廖斌斌 - 福建省致青生态环保有限公司
- 2019-06-27 - 2019-09-20 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种基于纤维素酶基因计算菌剂施加量的方法及其在畜禽粪污堆肥化处理中的应用，属于环境微生物技术领域。具体步骤是：分别提取堆肥原料和备选菌剂的DNA，利用荧光定量PCR分别扩增其16 S DNA和纤维素酶基因，以16 S DNA作为内参，根据溶解曲线法计算菌剂中纤维素酶基因的相对含量。所得值的200~500倍即为每公斤菌剂适用的堆体吨量。该方法既保证了菌体数量及活性，又有效缩短堆肥周期并提高堆肥效率，较盲目施加菌剂具定向、精准和灵活的优势。在畜禽粪污的快速堆肥资源化方面具有广阔的应用前景。
- 一种PD-L1表达水平检测的方法和试剂盒-201980001127.6
- 张道允;巩子英;孙永华;叶建伟 - 嘉兴允英医学检验有限公司
- 2019-04-26 - 2019-09-20 - C12Q1/6851
- 本申请公开了一种PD‑L1表达水平检测的方法和试剂盒。所述方法包括获取哺乳动物的体液样本；其中，所述体液样本中含有目标RNA和内参RNA，所述目标RNA源自于PD‑L1的基因；从所述体液样本中提取所述目标RNA和内参RNA；将所述目标RNA和内参RNA分别反转录为目标cDNA和内参cDNA；将所述目标cDNA和内参cDNA进行PCR扩增反应；根据扩增后目标cDNA的数量和内参cDNA的数量，确定所述哺乳动物中PD‑L1的表达水平。本申请的检测方法可以通过采集哺乳动物的体液样本进行PD‑L1表达水平检测，并进行PD‑L1免疫治疗预测，进而指导PD‑L1免疫治疗。
- 一种chIRF3荧光定量RT-PCR的检测方法-201910546770.9
- 何秀苗;陈艳艳;刘玉晶;黄海佩;李尚泉;陈博文;沈巍巍 - 广西民族大学
- 2019-06-24 - 2019-09-17 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种chIRF3荧光定量RT‑PCR的检测方法，包括引物设计、总RNA提取、chIRF3基因的扩增、扩增产物与pUC‑T载体连接构建质粒标准品、荧光定量RT‑PCR扩增体系与条件、灵敏性、重复性、特异性试验、传染性法氏囊病病毒感染三黄鸡的chIRF3检测。本试验根据chIRF3基因序列设计引物，先用普通PCR方法扩增出目的片段，chIRF3片段大小为146bp，以扩增的片段和质粒的重组体为标准品再进行荧光定量PCR检测，评价本方法的性能。建立起的标准曲线的相关系数非常接近于1，熔融曲线显示成单一峰，无非特异性扩增与引物二聚体出现，建立的检测体系可以稳定灵敏地检测到最低1×102copies/μL，组间及组内重复性试验结果显示其变异系数均在0.5％以下，为快速鉴定相关基因的转录水平及先天免疫调节机制的研究奠定基础。
- 检测GATA3基因相对表达量的双通道实时荧光定量RT-PCR方法-201910574974.3
- 王婷;刘翌超;石丽;问宇昕 - 陕西科技大学
- 2019-06-28 - 2019-09-17 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种检测GATA3基因相对表达量的双通道实时荧光定量RT‑PCR方法，在RT‑PCR检测法的基础上，设计了高特异性扩增GATA3基因和β‑actin基因部分片段的引物及TaqMan探针序列，将针对GATA3基因与β‑actin基因的引物及探针加入同一个反应体系中，进行实时荧光定量PCR反应，并进行双通道荧光采集，检测待测样本内GATA3基因的相对表达水平。本发明具有简便快速、特异性高、高通量、无污染等特点，适用于外周血、卵巢癌或乳腺癌肿瘤组织中GATA3基因的表达检测。
- 一种快速检测野外黄河鲤鱼产卵场的方法-201910467948.0
- 王俊;潘保柱;蒋小明;孙智薇 - 西安理工大学
- 2019-05-31 - 2019-09-13 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种快速检测野外黄河鲤鱼产卵场的方法，具体包括以下步骤：步骤1：在黄河区域内寻找疑似产卵场的地点作为检测对象，并在鲤鱼繁殖季节对检测对象所在地点进行水样采集；步骤2：将采集的水样进行抽滤，对抽滤后的滤膜提取DNA；步骤3：对提取的DNA进行荧光定量PCR分析，根据分析结果比较各采样地点的目的基因的表达含量，目的基因表达含量高的即为黄河鲤鱼的产卵场的位置。本发明通过检测水样中的目的基因的含量可以快速准确鉴定黄河鲤鱼产卵场的位置，本发明相较传统的寻找产卵场的方法节省大量的人力物力和财力。
- 从肿瘤组织检测ALK基因酪氨酸区高表达的方法及其试剂盒-201910494178.9
- 班贵宏;祝令香;郭永;卢临萍;杨文军;高娜 - 新羿制造科技（北京）有限公司
- 2019-06-09 - 2019-09-13 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种从肿瘤组织检测ALK基因酪氨酸区高表达的方法及其从肿瘤组织检测ALK基因酪氨酸区高表达的试剂盒。该方法中ALK基因上游引物和下游引物分别位于待扩增测靶标区域的两端，所述上游引物、下游引物和/或探针的部分序列跨所述二个相邻外显子拼接区域，使上下游引物之间的待扩增测靶标区域至少包括一个所述二个相邻外显子拼接区域；所述ALK基因的探针和所述参照基因的探针分别用不同的荧光基团进行标记。本发明的方法可以简便快速检测ALK基因酪氨酸激酶区的高表达，无论是由哪种伴侣融合造成的ALK融合，均可以进行准确检测，为靶向药物ALK抑制剂的临床治疗应用提供指导。
- 从肿瘤组织检测ROS1基因融合变异的方法及其试剂盒-201910494182.5
- 卢临萍;班贵宏;祝令香;郭永;杨文军;高娜 - 新羿制造科技（北京）有限公司
- 2019-06-09 - 2019-09-13 - C12Q1/6851
- 本发明提供一种从肿瘤组织检测ROS1基因融合变异的方法及其从肿瘤组织检测ROS1基因融合变异的试剂盒。该方法中ROS1基因上游引物和下游引物分别位于待扩增测靶标区域的两端，所述上游引物、下游引物和/或探针的部分序列跨所述二个相邻外显子拼接区域，使上下游引物之间的待扩增靶标区域至少包括一个所述二个相邻外显子拼接区域；所述ROS1基因的探针和所述参照基因的探针分别用不同的荧光基团进行标记。本发明的方法可以简便快速检测ROS1基因酪氨酸激酶区的高表达，无论是由哪种伴侣融合造成的ROS1融合，均可以进行准确检测，为靶向药物ROS1抑制剂的临床治疗应用提供指导。
- 一种测定原料和制剂中阿氏假囊酵母菌相对含量的方法-201410454818.0
- 杨俊;刘友勋;赵玉峰;闫明科;孙方杰;高树崇;李长正;张泽桥 - 乐普恒久远药业有限公司
- 2014-09-10 - 2019-09-10 - C12Q1/6851
- 本发明涉及原料和制剂中阿氏假囊酵母菌相对含量的方法，属于分子生物学技术领域。原料主要是以黄豆为原料，经阿氏假囊酵母菌发酵后的产物；其制剂是以该产物为原料，精制加工而成的制剂。本发明设计了针对阿氏假囊酵母菌核糖体RNA亚基内26S rDNA的引物，提取原料及其制剂内DNA为模板，聚合酶链反应进行DNA扩增，用电泳检测法检测阿氏假囊酵母菌。之后通过凝胶成像仪上检视和图像分析软件分析凝胶片显示的亮度，以无菌双蒸水为阴性对照，已知含量的DNA梯度标记物内不同分子量梯度DNA为基准值，计算出阿氏假囊酵母菌DNA经聚合酶链反应扩增后DNA特异产物含量，间接推算出原料和制剂中阿氏假囊酵母菌的相对含量。
- 检测GSTP1基因相对表达量的双通道实时荧光定量RT-PCR方法-201910538209.6
- 王婷;问宇昕;贺钰婷;乔晓斌 - 陕西科技大学
- 2019-06-20 - 2019-09-06 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种检测GSTP1基因相对表达量的双通道实时荧光定量RT‑PCR方法，在RT‑PCR检测法的基础上，设计了高特异性扩增GSTP1基因和β‑actin基因部分片段的引物及TaqMan探针序列，将针对GSTP1基因与β‑actin基因的引物及探针加入同一个反应体系中，进行实时荧光定量PCR反应，并进行双通道荧光采集，检测待测样本内GSTP1基因的相对表达水平。本发明具有简便快速、特异性高、高通量、无污染等特点，适用于前列腺、乳腺及其它肿瘤组织中GSTP1基因的表达检测。
- 针对食品中的志贺氏菌的多重PCR检测用引物组、试剂盒及检测方法-201410275960.9
- 李慧;蔡军;欧竞堃;刘洋;石嵩;王宇 - 中粮营养健康研究院有限公司;中粮集团有限公司
- 2014-06-19 - 2019-09-03 - C12Q1/6851
- 本发明适用于食品微生物安全检测领域，提供了一种针对食品中的志贺氏菌的多重PCR检测用引物组、试剂盒及检测方法。本发明的多重PCR检测用引物组、试剂盒及检测方法通过组合利用志贺氏菌的种属特异性侵袭相关基因，可实现检测覆盖范围广、特异性强且灵敏度高的技术效果，并且检测耗时短、操作较简单、设备要求低，可以节省大量的人力、物力和财力，适合快速检测的要求，易于在实际生产中推广应用。
- 用于检测与肺癌相关的SHOX2基因启动子区甲基化程度的试剂盒-201510870528.9
- 贺毅憬;彭艳;肖飞;刘杨;虞健;涂超峰 - 湖南宏雅基因技术有限公司
- 2015-12-01 - 2019-09-03 - C12Q1/6851
- 本发明公开了一种用于检测与肺癌相关的SHOX2基因启动子甲基化程度的试剂盒，其中包含目的基因引物对和内参基因引物对；以及检测目的基因和内参基因的Taqman探针，和用作阻断作用的阻断剂。所述目的基因引物对包括序列如SEQ ID NO.1所示的目的基因正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的目的基因反向引物；所述内参基因引物对包括序列如SEQ ID NO.3所示的内参基因正向引物和序列如SEQ ID NO.4所示的内参基因反向引物。所述检测的目的基因Taqman探针如SEQ ID NO.5所示，内参基因Taqman探针如SEQ ID NO.6所示。阻断剂序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
- 幽门螺杆菌阴阳性与克拉霉素耐药性同步检测法-201910447440.4
- 曾旭辉 - 深圳前海大井医疗股份有限公司
- 2019-05-27 - 2019-08-30 - C12Q1/6851
- 本发明公开一种幽门螺杆菌阴阳性与克拉霉素耐药性同步检测法，其包括(1)向样品中加入第一溶液、于80‑100℃下处理2‑10分钟后，进行第一离心得到第一上清液，其中第一溶液包含1‑10重量％的十二烷基硫酸钠，且pH为5.4‑5.6；(2)向第一上清液中加入抑制剂清除剂混合均匀后，进行第二离心得到第二上清液；(3)向第二上清液中依次加入蛋白酶K和第二溶液并于60‑80℃下孵育5‑20分钟，然后加入无水乙醇混匀得到提取液，其中第二溶液包含30‑50重量％盐酸胍和0.1‑1重量％马来酸，且pH为5.8‑6.2；(4)使用离心柱从提取液中纯化得到核酸；(5)检测核酸中的野生型菌含量和突变型菌含量，由此判断样品中幽门螺旋杆菌的阴阳性以及在阳性情况下幽门螺旋杆菌的克拉霉素耐药性。
- 一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法-201610297439.4
- 毛红菊;程祖乐;王琨;夏文薇;金庆辉;赵建龙 - 中国科学院上海微系统与信息技术研究所
- 2016-05-06 - 2019-08-16 - C12Q1/6851
- 本发明涉及一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)制备微柱阵列芯片；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到装置中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数，从而达到对核酸高灵敏定量的目的。本发明芯片组装简单，成本低；在保留了BEAMing实验高灵敏度特点的同时使得BEAMing技术的目标磁珠计数方法更加方便易行，为核酸的高灵敏检测提供了一个简便、快速的实用工具。
- 探针：反义探针组合物对高特异性DNA或RNA的检测-201280056114.7
- 戴维·A·谢弗 - 健能泰格技术公司
- 2012-09-14 - 2019-08-13 - C12Q1/6851
- 相互作用并标记的多核苷酸探针和反义探针和/或互补的靶探针，为我们提供了用于扩增或检测核酸的组合物及方法。这些组分的竞争性热力相互作用导致显示靶频率的信号变化，并且可以提供促成单碱基识别错误的检查功能。这些探针、反探针组合物能进行实时荧光定量PCR检测，终点检测和微生物的微阵列检测，耐药突变和癌症相关的变异。一些探针、反义探针在两个引物之间作为内部探针，一些作为引物探针。采用两个探针：反义探针系统检测同一模板的不同方面，以辨别或量化一些靶序列。还提供了增强靶扩增和检测特定单碱基变异的系统。探针也可通过引入一个碱基不匹配以增加相差一个碱基的正确与不正确的靶的热力学识别力而修饰。
- 一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法-201910228223.6
- 田庆常;谢恬 - 杭州师范大学
- 2019-03-25 - 2019-08-09 - C12Q1/6851
- 一种胞外囊泡/外泌体的数字PCR检测方法，属于生物技术及医学检测技术领域。其特征在于包含如下操作步骤：1）将胞外囊泡/外泌体与微球孵育结合；2）将结合后的胞外囊泡/外泌体进行数字核酸扩增检测，定量。相对于现有技术，本发明具有如下有益效果:1.可以实现胞外囊泡/外泌体的精确绝对定量；2.实现本发明所需的原料简便易得，操作简单，对设备无特殊要求，成本低廉；3.适用范围广，可以同时提供特异性和非特异性两种定量方式。
- 专利分类
