[发明专利]一种小麦抗条锈病的离体叶段鉴定方法

摘要

本发明公开了一种小麦抗条锈病的离体叶段鉴定方法，将待测小麦种子播种后8‑12d，待小麦幼苗第一叶完全展开，心叶刚露出时，取小麦幼苗第一叶在超净工作台上剪成2‑3cm长的叶段，叶正面向上平铺在含有60‑80mg/L苯并咪唑的0.5％水琼脂培养基表面；将条锈菌新鲜夏孢子与0.05％Tween 20水溶液混匀喷雾接种到剪好的叶段上；将接种后的小麦叶段转移至光照培养箱，10℃黑暗、湿度100％条件下保湿24h，然后在光照强度6000Lux‑8000Lux，相对湿度60％‑80％下培养14‑16d；按照0‑4级标准区分小麦条锈病的反应型。与现有技术相比，本发明通过在小麦离体叶片上接种培养小麦条锈菌，根据小麦条锈病的反应型即可快速鉴定小麦抗条锈病情况，省时省力，不受环境条件的影响，节省实验材料，节省空间，简便快捷。

主权项

1.一种小麦抗条锈病的离体叶段鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待测小麦种子播种于小花盆内，播种后8‑12d，待小麦幼苗第一叶完全展开，心叶刚露出时，取小麦幼苗第一叶在超净工作台上剪成叶段备用；2)离体叶段培养的垫衬物用0.5％的水琼脂培养基，具体配置方法为：称取琼脂粉1.0g放于250ml三角瓶中，加去离子水200ml，放入微波炉中溶解，封口膜封口，高压灭菌锅灭菌30min；超净工作台用75％医用酒精喷施后，紫外线灭菌15min，然后将10cm方形培养皿用75％的酒精擦拭后放在超净工作台上紫外线灭菌15min；用电子天平称量保绿剂0.012g，待水琼脂培养基温度降至不烫手时，于超净工作台内，加入保绿剂，混匀后倒培养基；3)待方形培养皿中的培养基凝固后，在超净工作台上将步骤1)剪好的叶段按顺序平铺在培养基表面，然后在小烧杯内将条锈菌新鲜夏孢子用清水湿润，调成糊状，然后在小型喷雾器内按照1g孢子：500ml水的比例加入0.05％Tween20水溶液混匀，均匀喷雾接种到剪好的叶段上，盖上培养皿盖；4)将接种后的小麦叶段移至光照培养箱，10℃黑暗、湿度100％条件下保湿24h，然后在光照强度6000Lux‑8000Lux下培养14‑16d；5)小麦材料对条锈菌的反应型按0、0；、1、2、3、4六个类型划分记载，其具体划分标准为：0型：叶上不产生任何可见的症状；0；型：叶上产生小型枯死斑，不产生夏孢子堆；1型：叶上产生枯死条点或条斑，夏孢子堆很小，数目很少；2型：夏孢子堆小到中等大小，较少，其周围叶组织枯死或显著褪绿；3型：夏孢子堆较大、较多，其周围叶组织有褪绿现象；4型：夏孢子堆大而多，周围不褪绿；此外，用“－”和“+”进行进一步精细划分，“－”表示夏孢子堆较其相应正常反应型的夏孢子堆略小；“+”表示夏孢子堆较其相应正常反应型的夏孢子堆略大；6)根据步骤5)反应型调查结果，进行小麦材料的抗性评价，0型为免疫，0；型为近免疫，1型为高抗，2型为中抗，3型为中感，4型为高感。