[发明专利]荧光原位检测人EGFR基因21号外显子p.L858R突变的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201811577714.3 | 申请日： | 2018-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN109652506A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 赵丹 | 申请（专利权）人： | 派德洛格（天津）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6841 | 分类号： | C12Q1/6841;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 杨欢 |
| 地址： | 300000 天津市滨海新区经济技术开发区洞庭路*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明属于分子生物学和肿瘤学领域，具体涉及一种荧光原位检测人EGFR基因21号外显子p.L858R突变的方法及试剂盒。方法包括：使用蛋白酶处理体系通透细胞；使用二类限制性内切酶暴露平末端；使用核酸外切酶处理体系；使用探针结合处理体系结合单链DNA；使用连接酶处理体系形成环状DNA；使用乙醇脱水处理体系，固定单链基因组DNA和环状探针DNA；使用聚合酶处理体系在聚合酶的作用下进行大量自我复制，产生60‑70kb左右的含重复序列的单链DNA；使用荧光探针结合处理体系，大量的荧光探针结合在含重复序列的单链DNA上；本发明提供的试剂盒可以通过特异性的探针，用少量的细胞或者临床组织样本检测突变。 | ||
| 搜索关键词： | 单链DNA 试剂盒 突变 荧光探针 荧光原位 重复序列 聚合酶 限制性内切酶 组织样本检测 蛋白酶处理 分子生物学 核酸外切酶 肿瘤学领域 细胞 基因组DNA 固定单链 环状探针 探针结合 体系结合 乙醇脱水 自我复制 环状DNA 连接酶 平末端 检测 探针 通透 暴露 | ||
【主权项】：
1.一种荧光原位检测人EGFR基因21号外显子p.L858R突变的方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)待检测样本固定好后，使用蛋白酶处理体系通透细胞，清洗；(2)使用二类限制性内切酶处理体系处理细胞基因组DNA，暴露平末端，清洗；(3)使用核酸外切酶处理体系，从平末端开始沿着5`‑3`方向降解单链DNA，保留另一条基因组单链DNA，清洗；(4)使用探针结合处理体系，荧光探针结合在上一步中保留的基因组单链DNA上，清洗；(5)使用连接酶处理体系，将探针形成环状DNA，清洗；(6)使用乙醇脱水处理体系，固定单链基因组DNA和环状探针DNA；(7)使用聚合酶处理体系，环状探针DNA以单链基因组DNA结合位置为起点，在聚合酶的作用下进行大量自我复制，产生60‑70kb左右的含重复序列的单链DNA，清洗；(8)使用荧光探针结合处理体系，大量的荧光探针结合在含重复序列的单链DNA上，清洗；(9)使用封片处理体系，封片；(10)最终在荧光显微镜下观察记录结果。
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