[发明专利]一种临床检测低丰度miR-33a/b的B-RCA方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201810307223.0 | 申请日： | 2018-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN108265109A | 公开（公告）日： | 2018-07-10 |
| 发明（设计）人： | 刘松梅;邓胥晶;陈玉琪;秦珊珊 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 彭劲松 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种临床检测低丰度miR‑33a/b的B‑RCA方法及试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明方法包括如下步骤：提取待测样本总RNA；使用特异性闭锁探针(检测miR‑33a/b、内参U6的探针的序列分别如SEQ ID NO.1、2所示)与待测RNA连接成环发生连接反应；用第二引物(序列如SEQ ID NO.3所示)对连接反应产物继续扩增发生B‑RCA反应；检测B‑RCA产物的荧光信号强度，并以内参基因U6进行标化。本发明的试剂盒包含上述探针、引物、阳性对照、阴性对照、DNA连接酶、DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料等。本发明检测灵敏度高、特异性强，检测限低，适用于多种标本的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 试剂盒 探针 检测 连接反应 临床检测 低丰度 生物检测技术 检测灵敏度 待测样本 第二引物 特异性强 阳性对照 阴性对照 荧光染料 荧光信号 总RNA 闭锁 成环 扩增 引物 内参 标本 基因 | ||
【主权项】：
1.一种基于B‑RCA技术的miR‑33a/b检测试剂盒，其特征在于：包含用于检测miR‑33a/b的闭锁探针，用于检测内参基因的闭锁探针，以及第二引物；所述的用于检测miR‑33a/b的闭锁探针的序列如下：5'‑PO4‑TACAATGCACTTTGCATTTCAGTTTACGGTTTAGCATTTCGCAATTTTTGCAATGCAAC‑3'；所述的第二引物的序列如下：5'‑CATTTCAGTTTACGGTTTAGC‑3'。
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