[发明专利]一种临床检测低丰度miR-33a/b的B-RCA方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种临床检测低丰度miR‑33a/b的B‑RCA方法及试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明方法包括如下步骤：提取待测样本总RNA；使用特异性闭锁探针(检测miR‑33a/b、内参U6的探针的序列分别如SEQ ID NO.1、2所示)与待测RNA连接成环发生连接反应；用第二引物(序列如SEQ ID NO.3所示)对连接反应产物继续扩增发生B‑RCA反应；检测B‑RCA产物的荧光信号强度，并以内参基因U6进行标化。本发明的试剂盒包含上述探针、引物、阳性对照、阴性对照、DNA连接酶、DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料等。本发明检测灵敏度高、特异性强，检测限低，适用于多种标本的检测。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于临床定量检测低丰度miR-33a/b的B-RCA方法及试剂盒。

背景技术

microRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类由内源基因编码的长度约为19～23个核苷酸的非编码单链分子。多数成熟的miRNAs具有高度保守性，可通过与AGO蛋白结合形成RNA诱导的沉默复合体，与目标mRNA的3’非编码区完全或不完全互补配对，从而导致mRNA降解(完全配对)或者抑制其翻译(不完全配对)，进而参与调控转录后水平的靶基因表达(Dong H,Lei J,Ding L,et al.MicroRNA:function,detection,and bioanalysis[J].Chem Rev,2013(8):6207-6233.)。研究表明，成熟miRNAs的表达具有时空和组织特异性，不仅参与调控正常的生理过程，而且在人体的代谢性疾病、肿瘤、神经性疾病等多种疾病的发生发展过程中也发挥重要的作用。目前人体已发现至少两千多种miRNAs，约占基因组的1％，并调控约30％的基因表达(Lewis BP,Burge CB,Bartel DP.Conserved seedpairing,often flanked by adenosines,indicates that thousands of human genesare microRNA targets[J].Cell,2005,120(1):15-20.)。近年来，miRNAs在动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)中的作用被广泛关注，研究表明miRNAs可通过各种各样的途径影响和调节ASCVD相关疾病以及相关疾病的风险因素，进而调控ASCVD的发生发展(Laffont B,Rayner K J.MicroRNAs in the Pathobiologyand Therapy of Atherosclerosis.[J].Canadian Journal of Cardiology,2017,33(3):313-324.)