[发明专利]一种siRNA靶向pH响应性载药光热治疗纳米粒子的制备方法

摘要

本发明公开的是一种siRNA靶向pH响应性载药光热治疗纳米粒子的制备方法，采用聚乳酸‑羟基乙酸共聚物和pH敏感材料羧甲基壳聚糖为基体包裹石墨烯量子点和阿霉素制备纳米粒子，并于其外表面连接siRNA，将抗癌药物盐酸阿霉素和石墨烯量子点包埋于聚乳酸‑羟基乙酸共聚物有机相中形成W/O初乳，包埋于pH敏感材料羧甲基壳聚糖水相得到W/O/W复乳液体系，在表面通过静电作用连接靶向分子siRNA，得到具有主动靶向性的聚合物纳米粒子，本发明制备的聚合物纳米粒子可以延长药物释放，增加聚合物微粒的稳定性，增强癌细胞治疗，不会在后期的实验过程中对细胞产生显著影响，实验操作过程简单、无毒、无害、绿色环保。

主权项

1.一种siRNA靶向pH响应性载药光热治疗纳米粒子的制备方法，其特征在于包括如下制备骤：步骤1)：选取浓度均为1mg/mL的石墨烯量子点和抗癌药盐酸阿霉素水溶液，置于4℃的冰箱中预冷备用，作为内部水相；步骤2)：将聚乳酸‑羟基乙酸共聚物溶于二氯乙烯中，配制成浓度为2‑4％的PLGA有机溶液，置于4℃的冰箱中预冷备用，作为中间油相；步骤3)：将水溶性羧甲基壳聚糖溶于水中，配制成浓度为3‑5％的羧甲基壳聚糖水溶液，置于4℃的冰箱中预冷备用，作为外部水相；步骤4)：将小干扰siRNA溶于磷酸盐缓冲液，得配制成浓度为20‑40μmol/L的均匀溶液，置于4℃的冰箱中预冷备用；步骤5)：取1‑2mL步骤1)获得的石墨烯量子点水溶液和1‑2mL抗癌药盐酸阿霉素水溶液混合，加入到8‑12mL步骤2)获得的PLGA有机溶液中，使用超声乳化仪超声1‑2min，振幅设为30，制得W/O初乳液；步骤6)：将步骤6)制得的W/O初乳液立即转移到18‑24mL步骤3)获得的羧甲基壳聚糖水溶液中，超声1‑2min，制得W/O/W复乳液；步骤7)：将步骤7)制得的W/O/W复乳液逐滴加入到60‑80mL去离子水中，磁力搅拌，陈化30‑60min，待有机溶剂挥发完全后，使用冷冻高速离心机，在14000r/m的转速下离心5‑10min，收集微粒，并用去离子水洗涤2‑3次以除去残留的分散剂，最后冻干保存，获得纳米粒子；步骤8)：称取40‑50mg步骤7)获得的纳米粒子分散于40‑50mL磷酸盐缓冲液并充分搅拌，使其分散均匀，获得分散液；步骤9)：取10‑20mL步骤4)所得的均匀溶液，在室温滴加至步骤8)获得的分散液中，均匀搅拌2h，随后静止20‑30min；步骤10)：将步骤9)所得的溶液经冷冻高速离心机，在14000r/m的转速下离心5‑10min，并用磷酸盐缓冲液清洗2‑3次，收集微粒，获得具有siRNA靶向pH响应性载药光热纳米粒子。