[发明专利]一种用酶法制备UDP的方法在审
| 申请号： | 201810158877.1 | 申请日： | 2018-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN108486195A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 李豪;李克进 | 申请（专利权）人： | 安徽翠鸟生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30;C07H19/10;C07H1/06 |
| 代理公司： | 苏州市指南针专利代理事务所(特殊普通合伙) 32268 | 代理人： | 金香云 |
| 地址： | 247100 安徽省池州市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用酶法制备UDP的方法，将尿苷、糖类碳源、无机离子与酵母混合、并以大肠杆菌产生重组表达的尿苷二磷酸酶作为催化剂进行保温发酵，得到尿苷二磷酸发酵液；然后进行冰块降温预处理，并通过分离提纯；再将纯化后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶，最后进行干燥、粉碎处理。本发明通过酵母与基因工程菌的联合作用，简便、经济、合理地大量合成尿苷二磷酸，可以获得纯度非常高的目标化合物，简化了生产工艺，适合于工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 尿苷二磷酸 酶法制备 酵母 大肠杆菌 基因工程菌 降温预处理 目标化合物 保温发酵 分离提纯 粉碎处理 糖类碳源 无机离子 重组表达 冰块 发酵液 合成尿 磷酸 醇沉 生产工艺 催化剂 联合 | ||
【主权项】：
1.一种用酶法制备UDP的方法，其特征在于包括如下步骤：1)将尿苷、糖类碳源、大肠杆菌产生重组表达的尿苷二磷酸酶、无机离子与酵母混合保温发酵，发酵终止后得尿苷二磷酸发酵液；2)将所述的尿苷二磷酸发酵液进行冰块降温预处理，并通过微滤装置分离出澄清的微滤液；3)将所述的微滤液进行离子交换，采用不同浓度NaCl溶液进行淋洗、洗脱；4)将所述洗脱后的收集液进行纳滤除盐；5)将所述纳滤除盐后的收集液用强碱型阴离子交换柱树脂进行脱色；6)将脱色后的尿苷二磷酸进行醇沉结晶、干燥。
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- 2009-10-15 - 2010-05-12 - C12P19/30
- 本发明涉及一种通过生物技术合成脱氧胞苷三磷酸的方法，具体步骤为：脱氧胞苷酸激酶的克隆，表达和纯化；丙酮酸激酶的克隆，表达和纯化；用激动剂脱氧腺苷三磷酸，烯醇式丙酮酸和游离的脱氧胞苷酸激酶、丙酮酸激酶从脱氧胞苷单磷酸合成脱氧胞苷三磷酸；包括以脱氧胞苷单磷酸为原料进行的脱氧胞苷三磷酸的生物催化合成；该过程由两步耦合的磷酸化反应经生成中间产物脱氧胞苷二磷酸实现。本发明的优点：表达量高，纯化简单，生产成本较低；产物的分离和纯化将更加简单；可溶解很多的溶质，从而可以满足不同的使用要求。
- 一种定向催化合成尿苷磷酰化合物的方法-200910030838.4
- 应汉杰;杨鹏;陈勇;张磊;黄小权;熊健;柏建新 - 南京工业大学;南京同凯兆业生物技术有限责任公司
- 2009-04-17 - 2009-10-14 - C12P19/30
- 本发明公开了一种定向催化合成尿苷磷酰化合物的方法，以尿苷或乳清酸和磷酸根离子为底物，以葡萄糖作为核糖基团供体和能量供体，利用有透性的微生物细胞为酶源，通过阶段性改变反应温度和溶氧量为手段，促使反应体系定向生物催化合成尿苷磷酰化合物。本发明可以根据需求生产三种物质的任意之一种，反应体系简单，无毒，生产成本低廉，控制手段简单易行，极大方便了工业化中的生产控制。以尿苷做底物时UMP、UTP和UDPG的得率分别可达到77％、67％、61％；以乳清酸做底物时UMP、UTP和UDPG的得率分别可达到70％，61％和53％。
- 一种胞二磷胆碱的制备方法-200810019854.9
- 应汉杰;熊健;汤佳鹏;张磊;李振江;柏建新;欧阳平凯 - 南京工业大学
- 2008-03-19 - 2009-09-23 - C12P19/30
- 本发明公开了一种胞二磷胆碱的制备方法，以氯化胆碱、磷酸根离子和胞苷一磷酸或其前体为底物，以葡萄糖、果糖、蔗糖或麦芽糖为能量供体，加入小分子化学效应物质，利用有透性的酵母细胞全细胞催化制备胞二磷胆碱。本发明通过建立代谢网络模型和代谢流量分析、采用小分子化学效应物质调控代谢流量从而提高能量自耦联及胆碱磷酸化效率的方法，利用有透性的酵母细胞来高效制备胞二磷胆碱，产品浓度大幅提高，底物的利用率也有提高。
- 一种利用生物磷酰化技术制备核苷酸的新方法-200910025981.4
- 应汉杰;欧阳平凯;陈勇;熊健;柏建新;张磊;杨蕴毅;周锡群 - 南京工业大学;南京同凯兆业生物技术有限责任公司
- 2009-03-16 - 2009-08-12 - C12P19/30
- 本发明公开了一种利用生物磷酰化技术制备核苷酸的新方法，以嘌呤或嘧啶类的核苷酸前体物质和磷酸根离子为底物，以葡萄糖作为核糖基团供体和能量供体，利用有透性的微生物细胞，通过化学小分子效应物质调控辅因子再生体系、物质能量偶联再生体系和代谢途径关键酶酶活，实现高效制备核苷酸。本发明采用小分子化学效应物质调控代谢流量，改善了能量及辅酶的再生及利用状况，使得代谢流向目标路径发生了迁移，代谢副产物减少，产物得率提高；本发明采用的改变细胞膜透性的方法加速了反应组分向微生物细胞的渗透，使得反应时间缩短，底物利用率提高。
- 专利分类
- 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶在水稻中的应用
- 一种来源于虎眼万年青的尿苷-5’-二磷酸木糖差向异构酶，其核苷酸序列及应用
- 一种来源于虎眼万年青的尿苷-5’-二磷酸半乳糖差向异构酶，其核苷酸序列及应用
- 一种来源于虎眼万年青的尿苷-5’-二磷酸芹菜糖/木糖合成酶，其核苷酸序列及应用
- 一种来源于虎眼万年青的尿苷-5’-二磷酸木糖合成酶，其核苷酸序列及应用
- 一种截短型尿苷-5’-二磷酸木糖合成酶，其核苷酸序列及应用
- 一种来源于虎眼万年青的截短型尿苷-5’-二磷酸木糖合成酶，其核苷酸序列及应用
- 一种尿苷二磷酸的制备方法
- 一种尿苷二磷酸葡萄糖及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的生物合成方法
- 一种生产尿苷二磷酸葡萄糖的方法及其专用工程菌
