[发明专利]靶标序列中所需核酸区的选择性扩增

摘要

提供了用于在两阶段聚合酶链式反应中选择性扩增所需的扩增子的方法和试剂盒。所述方法和试剂盒使用包含错配控制序列的靶标引物；其中位于所需的扩增子序列侧翼的任何引物对具有非匹配错配控制序列，并且位于非所需的扩增子序列侧翼的任何引物对具有匹配的错配控制序列。

主权项

1.用于在两阶段聚合酶链式反应中选择性扩增所需的扩增子的方法，其包括以下步骤：提供靶标遗传物质；使所述靶标遗传物质变性；在允许引物与所述靶标遗传物质退火的条件下添加一组靶标引物；所述靶标引物组中的每种引物包含靶标特异性序列错配控制序列，和通用杂交序列；所述通用杂交序列在每个靶标引物中是相同的；所述错配控制序列和通用杂交序列彼此紧邻；并且所述靶标引物组包含至少两个引物对，所述引物对适于扩增所述靶标遗传物质中至少两个重叠的所需的扩增子，使得有可能在重叠区域中获得至少一个非所需的扩增子；所述靶标引物组的进一步特征在于，位于所需的扩增子序列侧翼的任何引物对具有非匹配错配控制序列，而位于非所需的扩增子序列侧翼的任何引物对具有匹配的错配控制序列；进行第一多重聚合酶链式反应，产生与第一组引物中引物的不同的可能的成对的组合相对应的重叠的扩增子，所述重叠的扩增子保持在这样的条件下，使得其通过由每个引物中的通用杂交序列产生的互补序列之间的碱基对偶联而自杂交；在选择条件下处理所述重叠的扩增子，所述选择条件使得所需的扩增子由于由非匹配错配控制序列产生的非互补序列而变性，而非所需的扩增子由于由匹配的错配控制序列产生的额外互补序列而保持自杂交；添加通用引物，其各自包含与通用杂交序列互补的序列；进行第二聚合酶链式反应，导致所需的扩增子的选择性扩增。