[发明专利]一种脐带组织块冻存、复苏以及制备间充质干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种脐带组织块冻存、复苏以及制备间充质干细胞的方法，其包括如下步骤：对脐带组织进行消毒和清洗；将组织剪成组织段；剥离华通胶，将华通胶剪成块状；向块状组织中加入冻存液，先后在4℃下冷藏0.5小时，‑20℃冷藏2小时，‑80℃下冷冻1天，最后液氮中冷冻备用；需要时将块状组织从液氮中取出，恒温水浴解冻，利用无血清培养基清洗组织后，直接接种至明胶铺被的培养皿中制备间充质干细胞。本发明方法可有效保护冻存脐带组织，且方便复苏使用，尤其适合复苏后分离和扩增间充质干细胞。

主权项

1.一种脐带组织块冻存、复苏以及制备间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)用消毒液对脐带组织表面进行消毒，将脐带剪开，平铺，用缓冲液清洗脐带组织；(2)将步骤(1)获得的脐带组织剪成组织段；(3)剥离所述组织段的华通胶，将华通胶置于洁净的离心管内，用手术剪剪成块状；(4)向所述块状组织中加入无血清培养基，无血清培养基的体积为所述块状组织体积的二分之一，重悬块状组织后加入与无血清培养基等体积的预冷冻存液，分装至冻存管中；(5)将步骤(4)获得的含有块状组织的冻存管先后在4℃下冷藏0.5小时，‑20℃冷藏2小时，‑80℃下冷冻1天，最后在‑196℃液氮中冷冻备用；(6)需要时将步骤(5)冷冻的块状组织从液氮中取出，在恒温水浴中解冻，用移液管吸取解冻的组织块，放入洁净的离心管中，加入无血清培养基混匀，然后于低温离心，去掉上清液；(7)将步骤(6)离心后的块状组织接种至明胶铺被的培养皿中，加入无血清培养基后放入CO2培养箱内培养；以及(8)培养后的3～5天进行第一次换液，以后4～5天换一次液，待细胞融合度达到70％以上后，使用胰蛋白酶进行消化后传代，即获得脐带间充质干细胞。