[发明专利]利用DNA折纸结构构建级联反应的方法在审
| 申请号： | 201711087044.2 | 申请日： | 2017-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN107881211A | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 何丹农;徐艳;陈玮嘉;王萍;金彩虹 | 申请（专利权）人： | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/28 | 分类号： | C12Q1/28;C12Q1/26;C12Q1/00 |
| 代理公司： | 上海东亚专利商标代理有限公司31208 | 代理人： | 董梅 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提出一种利用DNA折纸结构构建级联酶的体系，包括级联酶分别与DNA组装、两种管状DNA折纸形成、级联酶分别与两种DNA折纸组装和带有级联酶的两种DNA折纸组装，实现酶间距的精准调节。将级联酶分别与两种不同位点延伸的管状DNA折纸连接，随后管状DNA折纸进一步杂交，从而拉近两酶之间的距离，达到调控酶间距的目的。利用折纸的可寻址的优点，精确调控级联酶的间距。将两种酶分别组装在两个DNA折纸上，利用折纸延伸链的杂交将两个酶有序级联，提高级联的效率。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 dna 折纸 结构 构建 级联 反应 方法 | ||
【主权项】：
一种利用DNA折纸构建级联反应的方法，其特征在于，将级联酶分别与两种不同位点设计的管状DNA折纸连接，随后管状DNA折纸进一步杂交，包括下述步骤：（1）级联酶分别与DNA组装：将级联酶分别与连接剂3‑(2‑吡啶二巯基)丙酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯（SPDP）以一定比例混合25℃孵育2hr后，超滤洗去过量的SPDP，随后SPDP修饰的两种酶的分别与巯基修饰的DNA 1、DNA2以一定比例均匀25℃孵育过夜，后采用超滤洗去过量的DNA，得到酶与DNA 的复合物Ⅰ和复合物Ⅱ；（2）两种管状DNA折纸形成：将替换链DNA分别与原有DNA订书钉链以等量的比例混合均匀，所得混合物随后以一定比例与所述的长链单链DNA在1×TAE‑Mg2+溶液体系中通过PCR退火，形成DNA折纸结构，形成的折纸结构采用超滤洗去过量订书钉链，分别得到折纸Ⅰ和折纸Ⅱ；（3）级联酶分别与两种DNA折纸组装：两种级联酶‑DNA复合物Ⅰ和复合物Ⅱ分别与两种管状DNA折纸Ⅰ和折纸Ⅱ以一定比例混合均匀，于45 ℃退火组装，分别得到级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ，通过琼脂糖凝胶电泳分离除去未连接的酶与折纸，得到包含复合物Ⅲ和复合物Ⅳ的条带，采用过滤柱纯化回收级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ；（4）带有级联酶的两种DNA折纸组装：将级联酶‑折纸复合物Ⅲ和复合物Ⅳ以一定比例混合均匀，于37℃退火组装，得到级联酶‑折纸终产物复合物Ⅴ。
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- 2010-09-25 - 2012-04-18 - C12Q1/28
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- 使用选择性信号抑制剂的非分离式测定-201080009820.7
- H·阿哈万·塔夫狄;R·德席尔瓦;T·麦克勒农;J·门多萨;M·萨尔瓦蒂;N·沙皮尔;谢文华 - 贝克曼考尔特公司
- 2010-02-26 - 2012-01-25 - C12Q1/28
- 公开了用于确定样品中分析物的方法、试剂、试剂盒和系统，该测定方法包括：通过加入化学发光标记的固定化特异性结合成员、被活化剂标记的特异性结合成员、选择性信号抑制剂、以及样品，形成在水溶液中的反应混合物，其中所述化学发光标记的固定化特异性结合成员和被活化剂标记的特异性结合成员可结合于存在于所述样品中的分析物、从而形成结合性复合物；以及向反应混合物中加入引发剂溶液，以便释放出可检测的、与存在于所述反应混合物中的被分析物结合的所述结合性复合物的含量相关的化学发光信号。
- 一种阴道炎检测试剂盒及其制备方法-201110190687.6
- 张旭;王国强;刘中华;戚雨;张辉 - 江苏硕世生物科技有限公司
- 2011-07-08 - 2012-01-18 - C12Q1/28
- 本发明公开了一种阴道炎检测试剂盒，包括以下组分：反应装置、加样试管、吸管、联检稀释液、联检显色液、联检终止液、说明书、联检比色卡，其中反应装置上设有过氧化氢反应孔、白细胞酯酶反应孔、唾液酸苷酶反应孔、β-葡萄糖醛酸酶反应孔、乙酰氨基葡萄糖苷酶反应孔和pH值孔，反应孔中有相应的反应基，反应基由相应的反应底物固化层、显色促进层和化学惰性载体层组成。本发明还提供了该检测试剂盒的制备方法以及新型化学载体的制备方法。本发明的检测试剂盒可用于区分细菌性阴道炎与其他阴道炎，并可进一步鉴定出阴道分泌物中的需氧菌/厌氧菌和兼性厌氧菌等菌群，该方法操作简单快速，准确性高，适用于临床常规特别是医院门诊的使用。
- 一种阴道炎联合检测试剂盒-201110172859.7
- 林德增;胡守旺;姚铭锋;谢佐福;周晓强;阳卫超;陈宁;崔天星;罗娜 - 泰普生物科学（中国）有限公司
- 2011-06-23 - 2012-01-18 - C12Q1/28
- 本发明目的在于提供一种操作简便，快速，灵敏，不需要高端仪器设备，价格低廉的阴道炎联合检测试剂盒。本发明的技术方案为提供一种阴道炎联合检测试剂盒，包括设置有四个干化学反应盲孔的孔式卡状反应装置和稀释液、显色液，所述四个盲孔设置有过氧化氢浓度测定检测试剂垫、唾液酸苷酶活性检测试剂垫、白细胞酯酶活性测定检测试剂垫、阴道液pH检测试剂垫。可同时检测阴道分泌物的pH值、过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶四个指标。通过以上四个指标判定阴道微生态环境，阴道正常菌群和致病菌群状况的细菌性阴道病联合检测试剂盒。
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