[发明专利]一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法

摘要

本发明涉及一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法，该方法包括以下步骤：⑴收集对数生长期的酿酒酵母悬浮液均分后离心，得到菌体沉淀A、B；⑵菌体沉淀A和B分别清洗后再次离心，得到清洗后的菌体沉淀A、B；⑶在清洗后的菌体沉淀A中加无菌水，经振荡处理、稀释，并测定600nm处OD值，记为ODx；⑷在清洗后的菌体沉淀B中加乙醇水溶液，经振荡处理并测定600nm处OD值，记为ODe；⑸乙醇水溶液处理的酵母菌液接种到YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为ODp；⑹稀释后的酵母菌液接种到YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为ODy；⑺以ODx为横坐标，ODy为纵坐标，拟合得到y=ax+b的公式；⑻ODp代入y=ax+b后，得x值；⑼将x/ODe的值定义为耐受值。本发明操作简单、适用范围广。

主权项

一种酿酒酵母乙醇耐受性的评价方法，包括以下步骤：⑴收集对数生长期的酿酒酵母悬浮液40mL，均分到两个50mL的离心管中离心，分别得到菌体沉淀A、菌体沉淀B；⑵所述菌体沉淀A和所述菌体沉淀B分别采用20~40mL无菌水清洗后再次离心，得到清洗后的菌体沉淀A、清洗后的菌体沉淀B；⑶在所述清洗后的菌体沉淀A中加入20~40mL无菌水，混合均匀后倒入50mL无菌锥形瓶A，经振荡处理得到无菌水处理的酵母菌液；该无菌水处理的酵母菌液采用无菌水分别稀释成20%、40%、60%、80%、100%体积浓度的酵母菌液，并测定600nm处OD值，记为ODx；⑷在所述清洗后的菌体沉淀B中加入20~40mL体积浓度为8~18%的乙醇水溶液，混合均匀后倒入50mL无菌锥形瓶B，经振荡处理得到乙醇水溶液处理的酵母菌液，并测定600nm处该乙醇水溶液处理的酵母菌液OD值，记为ODe；⑸将200~1000μL所述乙醇水溶液处理的酵母菌液接种到20mL YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为ODp；⑹将200~1000μL所述步骤⑶稀释后的酵母菌液接种到20mL YPD培养基中，经振荡培养后测定OD值，记为ODy；⑺以ODx为横坐标，ODy为纵坐标，在excel表格中绘制散点图，拟合得到y=ax+b的公式，其中a、b为拟合公式中的已知参数；⑻ODp作为公式中的y值，代入y=ax+b后，得到x值；⑼将x/ODe的值定义为酿酒酵母经乙醇水溶液处理后的耐受值；当x/ODe=1时，表示酵母生长或存活不受乙醇水溶液影响，耐受度为100%；当x/ODe=0时，表示酵母全部死亡，耐受度为0；当0<x/ODe<1，比值越靠近1表示酵母乙醇耐受性越大；当1<x/ODe≤1.1表示实验结果有误差，但在允许范围之内。