[发明专利]一种精氨酸脱亚胺酶包涵体的复性方法在审
| 申请号： | 201710412954.7 | 申请日： | 2017-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN107177577A | 公开（公告）日： | 2017-09-19 |
| 发明（设计）人： | 薛剑峰;涂铭;岳星星;康涛;钟正明 | 申请（专利权）人： | 江苏康禾生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/78 | 分类号： | C12N9/78 |
| 代理公司： | 北京泛华伟业知识产权代理有限公司11280 | 代理人： | 李渤,郭广迅 |
| 地址： | 225300 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种精氨酸脱亚胺酶包涵体的复性方法，所述方法包括以下步骤1)破碎菌体，离心并收集沉淀获得包涵体；2)将步骤1)得到的沉淀使用磷酸缓冲液重悬，高压复性，离心并收集上清液；3)纯化步骤2)得到的上清液，获得有活性的精氨酸脱亚胺酶。本发明的方法操作简便、快捷，为精氨酸脱亚胺酶的大规模工业生产提供了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 精氨酸 亚胺 包涵 复性 方法 | ||
【主权项】：
一种精氨酸脱亚胺酶包涵体的复性方法，所述方法包括以下步骤：1)破碎菌体，离心并收集沉淀获得包涵体；2)将步骤1)得到的沉淀使用磷酸缓冲液重悬，高压复性，离心并收集上清液；其中，所述高压复性的条件为：将包涵体加压至150MPa‑250MPa，并维持该压力10‑20h；或将包涵体加压至150MPa‑250MPa，维持1‑5h后减压至60‑120MPa，并维持10‑20h；3)纯化步骤2)得到的上清液，获得有活性的精氨酸脱亚胺酶。
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- 张涛;江波;黄凯;沐万孟 - 江南大学
- 2016-10-14 - 2017-02-22 - C12N9/78
- 一种以L‑精氨酸为原料的L‑鸟氨酸双酶耦合制备方法，属于生物工程技术领域。本发明涉及一株芽孢杆菌（Rummeliibacillus pycnus ）SK31.001，利用分子生物技术，将来源于该菌株的精氨酸酶异源过量表达。该精氨酸酶区别于其他精氨酸酶，在Ni2+催化下，在pH6.5环境下具有较高酶活。经镍柱纯化后得到的精氨酸酶与商业化的刀豆脲酶双酶耦合制备L‑鸟氨酸。以L‑精氨酸为底物，在40‑50℃、pH6.5的反应条件下，经5h的转化反应，可得37.8 g/L的L‑鸟氨酸。L‑精氨酸的转化率达99.7%，且反应中生成的尿素被除去。本发明经济环保、速度快，产品纯度高，应用前景广泛。
- 来自冬虫夏草中国被毛孢的精氨酸酶、编码基因及其应用-201410307406.4
- 柳志强;郑裕国;林善;薛亚平;吴晖;李邦良;许静;许峰;王鸿艳 - 浙江工业大学;杭州中美华东制药有限公司
- 2014-06-30 - 2017-01-04 - C12N9/78
- 本发明涉及来自“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢参与尿素循环机制机理的精氨酸酶(Arginase)，编码这个酶的基因及其应用。所述精氨酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码基因核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明从原理上对L‑精氨酸合成尿素进行了详细研究，提供了“百令”生产菌冬虫夏草中国被毛孢参与尿素循环机制机理的精氨酸酶及其编码基因，本发明所提供的核苷酸序列的克隆DNA可以用来通过转导、转化、结合转移的方法转入工程菌中，通过调节催化L‑精氨酸制备相应的尿素的酶对应编码基因的表达，赋予宿主精氨酸酶的高表达性，为扩大精氨酸酶的生物应用提供了有效途径，具有重大应用前景。
- 一种实现人源精氨酸酶-1在大肠杆菌表面展示的方法-201610218512.4
- 张贞;马立新;卞璐;唐荣兴 - 湖北大学
- 2016-04-11 - 2016-08-24 - C12N9/78
- 本发明提出了一种实现人源精氨酸酶‑1在大肠杆菌表面展示的方法。步骤为：1)构建人源精氨酸酶‑1表面展示重组质粒；2)将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，获得基因工程菌株；3)将重组菌株摇瓶培养，检测人源精氨酸酶‑1展示效率和酶活；4)利用重组菌株高效转化L‑Arginine(L‑精氨酸，L‑Arg)合成L‑Ornithine(L‑鸟氨酸，L‑Orn)。本发明通过改进的Type V自转运蛋白(Antigen 43)实现人源精氨酸酶‑1在大肠杆菌细胞表面有效展示，加速实现了人源精氨酸酶‑1工业化应用。与原始的Type V自转运蛋白(Antigen 43)展示系统相比，明显提高人源精氨酸酶‑1展示效率和酶活，与现有几丁质固定化法相比，降低合成成本，缩短工艺流程，简化纯化步骤。
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