[发明专利]检测DNA聚合酶活性的方法及检测试剂盒有效
| 申请号： | 201710324886.9 | 申请日： | 2017-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN107034280B | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 蔡统聪;邓艳华;杨浩;黄田田;孙康成;王益琼 | 申请（专利权）人： | 菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 44224 广州华进联合专利商标代理有限公司 | 代理人： | 徐春祺 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区西丽留*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种检测DNA聚合酶活性的方法及检测试剂盒。该方法将待测DNA聚合酶与足量的待补平模板混合，在dNTP存在的条件下，通过待测DNA聚合酶诱导待补平模板中的第一DNA片段延伸形成与凸出片段的碱基互补的补平片段得到补平模板。补平模板中的U碱基被足量的UDG酶消化去除，得到适于PCR扩增的模板，正向引物针对凸出片段设计，反向引物针对第一DNA片段的5’端设计，诱导第一模板链扩增。而未经补平的模板经消化酶去除U碱基后则无法与正向引物配对，即不能进行PCR扩增反应。将待测DNA聚合酶的CT值带入由DNA聚合酶标准品建立的标准曲线中，运算即可获得待测DNA聚合酶的酶活性。 | ||
| 搜索关键词： | 补平 凸出 正向引物 碱基 足量 去除 诱导 标准曲线 反向引物 检测试剂 碱基互补 标准品 酶活性 酶消化 模板链 消化酶 种检测 扩增 配对 运算 延伸 | ||
【主权项】：
1.一种检测DNA聚合酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n提供待补平模板，所述待补平模板包括第一模板链和第二模板链，所述第一模板链包括第一DNA片段，所述第二模板链包括第二DNA片段以及与所述第二DNA片段5’端相连接的凸出片段，所述第二DNA片段与所述第一DNA片段碱基互补，所述凸出片段中含有U碱基；/n在dNTP存在的条件下，将待测DNA聚合酶与足量的所述待补平模板混合，使得所述第一DNA片段的3’端延伸形成补平片段，得到补平模板，所述补平片段与所述凸出片段碱基互补；/n将所述补平模板与正向引物、反向引物、探针、dNTP以及足量的UDG酶混合进行实时荧光定量PCR扩增反应，其中所述正向引物针对所述凸出片段设计，所述反向引物针对所述第一DNA片段的5’端设计，所述探针用于检测所述第一DNA片段；以及/n获取所述实时荧光定量PCR扩增反应的CT值，将所述CT值带入由DNA聚合酶标准品建立的标准曲线中，得到所述待测DNA聚合酶的酶活性。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司，未经菲鹏生物股份有限公司;广东菲鹏生物有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710324886.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
