[发明专利]一种利用大肠杆菌系统制备小鹅瘟病毒样颗粒的方法有效
| 申请号： | 201710049003.8 | 申请日： | 2017-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN106754981B | 公开（公告）日： | 2020-06-09 |
| 发明（设计）人： | 曲光刚;沈志强;金婷婷;李书光;武曰星;王长江 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12N15/35 | 分类号： | C12N15/35;C12N15/70;C12N7/04;C07K14/015;C07K16/08;A61K39/23;A61P31/20 |
| 代理公司： | 宁波甬致专利代理有限公司 33228 | 代理人： | 李迎春 |
| 地址： | 256600 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法，一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT,并克隆到pET‑Sumo载体上，构建重组表达载体pET‑Sumo‑VP2，并将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导，获得可溶性重组VP2重组蛋白；将重组蛋白用ULP酶酶切后通过Ni柱纯化得到纯化的VP2蛋白。电镜结果显示酶切后的VP2蛋白可形成小鹅瘟病毒样颗粒，并且纯化后的VP2蛋白具有良好的反应原性，可用于小鹅瘟病毒基因工程亚单位疫苗的制备。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 大肠杆菌 系统 制备 瘟病 颗粒 方法 | ||
【主权项】：
一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化得到优化后的VP2基因序列，扩增所述的优化后的VP2基因序列，并克隆到pET‑Sumo载体上，构建表达载体pET‑Sumo‑VP2，将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导获得可溶性重组VP2蛋白，将重组VP2蛋白用ULP酶进行30℃酶切2 h,使VP2蛋白与Sumo标签分开，酶切后的蛋白用Ni柱纯化，可得到纯化的VP2蛋白，将纯化好的VP2蛋白透析到PBS中，通过电镜观察，该重组蛋白VP2可形成病毒样颗粒。
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- 一种利用大肠杆菌表达系统制备猪细小病毒病毒样颗粒亚单位疫苗的方法及应用-201610557798.9
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- 2016-07-15 - 2016-11-23 - C12N15/35
- 本发明公开了一种猪细小病毒VP2蛋白的编码基因、原核表达VP2蛋白病毒样颗粒的方法及其在疫苗制备中的应用。对序列进行优化，人工合成VP2基因，将合成的基因插入pET28a载体，然后和伴侣蛋白质粒共转入BL21(DE3)宿主菌中，使VP2蛋白和伴侣蛋白共表达，以促进VP2蛋白的正确折叠。实验证明，通过该重组菌表达的VP2蛋白能在体外实现自组装，且具有良好的免疫原性。使用由本发明表达的VP2蛋白制备的病毒样颗粒亚单位疫苗免疫小鼠和豚鼠能够诱导高水平的血凝抑制抗体和中和抗体产生，而且此疫苗能够预防豚鼠免受猪细小病毒强毒的感染。采用本发明的重组菌能够高效制备猪细小病毒病毒样颗粒，生产成本低、操作简单、具有更好的生物安全性。
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