本发明提供了一种带有His和Flag双标签的猪细小病毒(PPV)全长感染性克隆的制备方法,包括如下步骤:1)以PPV DNA为模板,分别使用序列如SEQ ID NO.1~2、SEQ ID NO.3~4所示引物扩增,再将所得扩增产物为模板,以序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所示引物进行融合PCR扩增,得F3片段;2)将pKQLL‑T质粒经Stu I和SnaB I产生平末端切口的限制性内切酶线性化质粒,再将F3片段与其连接,得重组质粒;3)使用限制性内切酶BamH I和Xba I双酶切重组质粒,回收带有His和Flag双标签的PP PPV全长片段;4)将带有His和Flag双标签的PPV全长片段转染动物细胞,即可。本发明的方法能够成功产生高滴度的PPV,可用于抗猪细小病毒药物的筛选,具有良好的应用前景。
本发明提供了一种猫细小病毒VP2蛋白及所得自主组装病毒样颗粒,属于VLP疫苗领域。本发明提供的猫细小病毒VP2基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明根据大肠杆菌的密码子的偏爱性,人工修饰合成了猫细小病毒VP2基因的DNA序列,应用序列表达的VP2蛋白具有良好的免疫活性,可有效保护宠物猫及猫科动物免受猫瘟病毒侵害。