[发明专利]一种高特异性的碱基突变多重PCR检测方法在审
| 申请号： | 201611032170.3 | 申请日： | 2016-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN108103159A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 刘磊;宋炎;张乐橦;刘军;朱红梅;叶明芝 | 申请（专利权）人： | 天津华大医学检验所有限公司;深圳华大基因股份有限公司;广州华大基因医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 300000 天津市自贸区（空港经济*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高特异性的碱基突变多重PCR检测方法，包括：在无3’‑5’外切酶活性且有焦磷酸解活性的DNA聚合酶的作用下，在焦磷酸盐存在的环境下，使用多对修饰引物进行PCR扩增，修饰引物的上下游引物的3’末端均是双脱氧核苷酸，该3’末端与待检测突变型模板上下游序列互补，DNA聚合酶依赖模板而焦磷酸解所述修饰引物的3’末端与模板互补的双脱氧核苷酸，多对引物特异性结合模板并正常延伸，实现多重PCR扩增。本发明解决了多重PCR非特异性条带干扰和引物二聚体的问题，提高检测特异性和灵敏度，增加体系对引物的容量；可针对肿瘤患者或健康人采集的体液DNA进行检测。 | ||
| 搜索关键词： | 修饰引物 双脱氧核苷酸 多重PCR检测 碱基突变 焦磷酸 检测 多重PCR扩增 特异性结合 突变型模板 外切酶活性 引物二聚体 多对引物 非特异性 焦磷酸盐 序列互补 多重PCR 对引物 灵敏度 体液 条带 引物 肿瘤 采集 延伸 健康 | ||
【主权项】：
1.一种高特异性的碱基突变多重PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括：在无3’-5’外切酶活性且有焦磷酸解活性的DNA聚合酶的作用下，在焦磷酸盐存在的环境下，使用多对修饰引物进行PCR扩增，所述修饰引物的上下游引物的3’末端均是双脱氧核苷酸，该3’末端与突变位点上下游的野生型序列互补，所述DNA聚合酶依赖模板而焦磷酸解所述修饰引物的3’末端与模板互补的双脱氧核苷酸，引物正常延伸，实现多重PCR扩增，产物包含野生型与突变型DNA片段。
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