[发明专利]筛选基因编辑产物的方法有效
| 申请号： | 201610695151.2 | 申请日： | 2016-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN106319045B | 公开（公告）日： | 2020-01-31 |
| 发明（设计）人： | 王克剑;华宇峰;王春 | 申请（专利权）人： | 中国水稻研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 33212 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310006 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种ACT‑PCR筛选基因编辑产物的方法，包括如下步骤：1)、提取野生型及待测样品的基因组DNA；2)、设计引物：使正向引物FA的3’末端跨过基因编辑拟切割位点；反向引物RA是以目标基因的基因组序列为参照，位于互补链的下游，反向引物RA的Tm值不低于正向引物FA；3)、获得最大临界退火温度T | ||
| 搜索关键词： | 退火 基因组DNA 反向引物 正向引物 野生型 扩增 条带 琼脂糖凝胶电泳 纯合突变体 杂合突变体 待测样品 基因组序 扩增产物 目标基因 切割位点 设计引物 互补链 基因 引物 跨过 | ||
【主权项】：
1.ACT-PCR筛选基因编辑产物的方法，其特征是包括如下步骤：/n1)、提取野生型及待测样品的基因组DNA，以获得PCR模板；/n2)、设计引物：/n以目标基因的基因组序列为参照，设计ACT-PCR正向引物FA，使正向引物FA的3’末端跨过基因编辑拟切割位点；反向引物RA是以目标基因的基因组序列为参照，位于互补链的下游，反向引物RA的Tm值不低于正向引物FA；/n正向引物FA的3’末端跨过基因编辑拟切割位点为2～6bp；/n正向引物FA的长度为20bp；/n3)、利用步骤2)的引物对FA/RA以野生型基因组DNA为模板进行温度梯度PCR扩增；将所得的扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行分离；/n能够扩增出目的条带所对应的最高温度为最大临界退火温度T
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