[发明专利]一种人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明提供了一种人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，所述检测试剂盒包括PCR反应液，且所述PCR反应液包括PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、用于扩增靶多核苷酸的上下游引物和用于检测靶多核苷酸的探针。本发明所提供的人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒具有很好的特异性，且操作快速、方法简便、灵敏度高，同时在反应体系中增加的内标能够有效防止检测呈假阴性。本发明所提供的人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒在提取DNA时使用核酸快速释放法，该法简便快速，无需加热。

主权项

1.一种人乳头瘤病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括PCR反应液，且所述PCR反应液包括PCR缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、用于扩增靶多核苷酸的上下游引物和用于检测靶多核苷酸的探针；所述用于检测靶多核苷酸的探针为HPYG1‑P1、HPYG1‑P2、HPYG1‑P3、HPYG2‑P、HPYG2‑P1、HPYG3‑P1、HPYG3‑P2、HPYG4‑CY5和HPYG5‑ROX的序列；其中，用于检测HPV16、31、35、33、52、58的HPYG1‑P1、HPYG1‑P2、HPYG1‑P3的序列分别为：HPYG1‑P1：TCCTCGTGCAAACTTAATCTGCACCAC‑FAM；HPYG1‑P2：TTCCTCTATTAAACCTAATTTGCACCACGT‑FAM；HPYG1‑P3：CTCGTGCAAACTTAATCTGGACCACG‑FAM；用于检测HPV18、45、59、39、68的HPYG2‑P、HPYG2‑P1的序列分别为：HPYG2‑P：TCCCCTCCCCATCTGTACCTTC‑FAM；HPYG2‑P1：ACCCATCCCCGTCTGTACCTTC‑FAM；用于检测HPV51、53、56、66的HPYG3‑P1、HPYG3‑P2的序列分别为：HPYG3‑P1：TCATCCTCATCCTCTGAGCTGTCCAA‑FAM；HPYG3‑P2：TCATCCTCCTCCTCTGAGCTGTCAAA‑FAM；用于检测HPV16的HPYG4‑CY5序列为：CCACAGTTATGCACAGAGCTGCAAACAAC‑CY5；用于检测HPV18的HPYG5‑ROX序列为：AATCATCAACATTTACCAGCCCGACG‑ROX；所述用于扩增靶多核苷酸的上下游引物为HPYG1‑F、HPYG1‑R1、HPYG1‑R2、HPYG2‑F、HPYG2‑R1、HPYG2‑R2、HPYG3‑F1、HPYG3‑F2、HPYG3‑R1、HPYG3‑R2、HPYG4‑F、HPYG4‑R、HPYG5‑F和HPYG5‑R的序列；其中，HPYG1‑F的序列为AACTGGAAATCCTTTTTCTCAAGG；HPYG1‑R1的序列为CTCCATCGTTTTCCTTGTCCTC；HPYG1‑R2的序列为CTCCATCGTTTTCTTTGTCCTC；HPYG2‑F的序列为TTTGTGTGTCCGTGGTGTGC；HPYG2‑R1的序列为AACCAGCCATTACAACCCG；HPYG2‑R2的序列为AACCATCCGTTACAACCCG；HPYG3‑F1的序列为GACCTGCAATGCAATGAGCAA；HPYG3‑F2的序列为GACTTGCAATGCTACGAGCAA；HPYG3‑R1的序列为CTCCTGCAAATGGTCTACTTCATC；HPYG3‑R2的序列为GGTAGCTGGTCACGCATATTATCTAC；HPYG4‑F的序列为CACAGGAGCCACCCAGAAAG；HPYG4‑R的序列为GTCATATACCTCACGTCGCAGTAAC；HPYG5‑F的序列为TCAGAGGAAGAAAACGATGAAATAG；HPYG5‑R的序列为CTGGCTTCACACTTACAACACATAC。