[发明专利]改造谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌精氨酸合成途径中关键酶NAGK来提高精氨酸产量的方法在审
| 申请号： | 201510790468.X | 申请日： | 2015-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN105238810A | 公开（公告）日： | 2016-01-13 |
| 发明（设计）人： | 陈雪岚;熊勇华;汤力;张斌 | 申请（专利权）人： | 江西师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N15/54;C12R1/15 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 330000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了改造谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌精氨酸合成途径中关键酶NAGK来提高精氨酸产量的方法，通过引物设计在NAGK的第311位和第312位进行了点突变，使两个连续的天冬氨酸残基发生了突变，本试验将其突变为两个连续的精氨酸残基，构建了突变的argB M2基因，本发明将来源于谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌的精氨酸生物合成途径中关键酶NAGK编码基因argB进行点突变，使突变的NAGK对精氨酸的反馈抑制敏感性降低，提高了酶活和IC50值；将突变的argB M4置换至基因组中，使得精氨酸的产量得到了提高。 | ||
| 搜索关键词： | 改造 谷氨酸 杆菌 钝齿棒 精氨酸 合成 途径 关键 nagk 提高 产量 方法 | ||
【主权项】：
改造谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌精氨酸合成途径中关键酶NAGK来提高精氨酸产量的方法，其特征在于，(1)通过引物设计在NAGK的第311位和第312位进行了点突变，使两个连续的天冬氨酸残基发生了突变，本试验将其突变为两个连续的精氨酸残基，构建了突变的argB M2基因；并联合将NAGK的第19位和26位的谷氨酸残基和组氨酸残基分别突变为精氨酸残基和谷氨酸残基，构建了突变的argB M4基因；(2)通过酶活和I50的比较，将argB M4基因置换至谷氨酸棒杆菌或钝齿棒杆菌基因组中，提高了精氨酸产量。
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- 陈雪岚;熊勇华;陈民良;万方 - 江西师范大学
- 2015-07-15 - 2015-11-04 - C12N15/77
- 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌及其提高精氨酸产量的方法，所述谷氨酸棒杆菌和钝齿棒杆菌的dtsR1基因被敲除，本发明将dtsR1基因敲除后，使其调控的α-酮戊二酸脱氢酶复合物(oxoglutarate dehydrogenase complex，ODHC)的转录水平大幅下降，使α-酮戊二酸流向了精氨酸；同时在发酵培养基中添加吐温80或油酸或二者混合物弥补了dtsR1缺失造成的营养缺失，在发酵培养对数生长初期添加吐温40诱导了磷酸戊糖途径的基因转录水平大幅提高，从而为精氨酸的合成提供了足量的NADPH，省去了采用其他繁琐的分子育种手段来提高NADPH供应及提高三羧酸循环途径中α-酮戊二酸的其他积累方法。
- 一种高产L-丝氨酸重组谷氨酸棒杆菌的构建及其发酵方法-201410699878.9
- 张晓梅;许正宏;史劲松;朱勤健;郭恒华;张冬竹 - 江南大学;安徽华恒生物科技股份有限公司
- 2014-11-28 - 2015-04-29 - C12N15/77
- 本发明提出了代谢工程改造和发酵工艺相结合的策略，一方面通过代谢工程手段转变代谢流从糖酵解途径流向L-丝氨酸合成途径，提高了L-丝氨酸的糖酸转化效率；另一方面通过添加营养成分满足代谢改造后导致的谷氨酸棒杆菌对营养物质的需求，解决菌体生长缓慢的问题，提高L-丝氨酸的生产强度。
- 一种通过引入聚-β-羟基丁酸酯代谢途径提高钝齿棒杆菌L-精氨酸产量的方法-201410748914.6
- 饶志明;秦敬儒;徐美娟;张显;杨套伟 - 江南大学
- 2014-12-09 - 2015-04-22 - C12N15/77
- 通过引入PHB代谢途径到Corynebacterium crenatum SYPA中，从而高产L-精氨酸，属于基因工程和生物工程领域。该发明酶切质粒pBHR68获得合成PHB的操纵子，与棒杆菌表达载体pDXW-10连接，并将其在C.crenatum SYPA中表达，为国内外首次通过引入PHB代谢途径在野生型钝齿棒杆菌中高产L-精氨酸。对构建的基因工程菌株进行酶活力测定及胞内辅酶水平研究证明C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB合成L-精氨酸的能力得到加强。最终在30℃，pH 7.0及600rpm条件下，C.crenatum SYPA/pDXW-10-phbCAB在5-L发酵罐发酵96h可产得43.21 g/L的L-精氨酸，为国内外首次通过引入PHB代谢途径到菌体内，调节胞内代谢网络，最终实现高产L-精氨酸的目的，为微生物工业化生产L-精氨酸提供了基础。
- 一种利用重组钝齿棒杆菌生产黑色素的方法-201410748908.0
- 饶志明;胡桂元;郭静;杨套伟;徐美娟;张显 - 江南大学
- 2014-12-09 - 2015-04-01 - C12N15/77
- 一株产酪氨酸酶重组钝齿棒杆菌的构建及其在黑色素生产中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过本实验室前期筛选得到的被命名为Streptomyces kathirae SC-1的菌株，利用分子技术克隆了以来自Streptomyces kathirae SC-1的酪氨酸酶基因(melC1C2)，构建重组表达载体pXMJ19-melC1C2，并将其电击转化到C.crenatum SYPA5-5，成功构建了基因工程菌C.crenatum SYPA5-5/pXMJ19-melC1C2。对构建的基因工程菌进行酶活测定，发现重组菌的酶活为61.5U/ml，而原始菌株C.crenatum SYPA5-5没有酶活。以L-酪氨酸为底物进行全细胞转化，黑色素产量为3.49g/L。本发明为首次将酪氨酸酶克隆到重组钝齿棒杆菌并用于黑色素的生产。
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