[发明专利]微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶的方法

摘要

本发明涉及微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶的方法，具体为将产生葡萄糖氧化酶菌种活化，再经过逐级低温驯化，使菌种在低温环境中生长良好，将低温驯化后的葡萄糖氧化酶产生菌在10～16℃逐级扩大培养，按发酵液体积的3～9％接种量接种于液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，得低温葡萄糖氧化酶，收集到的粗酶液根据不同需要和使用对象不同，进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。本发明生产的低温葡萄糖氧化酶在低温下具有高酶活力及高催化效率，简化生产工艺，缩短加工时间，降低生产成本，提高生产效率，改善并提高产品质量；该酶制剂应用操作简单、方便、快捷、具有更广阔的工业开发价值与市场应用优势。

主权项

微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将能产生葡萄糖氧化酶的菌种先活化，再经过逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低温环境中生长良好，当菌种能在低温下稳定生长即驯化结束；该菌种的低温驯化培养基为：葡萄糖20.0～50.0g，蛋白胨1.0～5.0g，(NH₄)₂SO₄2.0～3.0g，CaCO₃1.0～5.0g，pH值为自然，于103kpa、121℃高压蒸气灭菌30min；所述的能产生葡萄糖氧化酶的菌种来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号：1.3319或1.7760或1.3118；(2)按常规方法将步骤(1)中低温驯化后的葡萄糖氧化酶产生菌在液体种子培养基中于10～16℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；所述的液体种子培养基为：蛋白胨7.0～12.0g,牛肉膏2.0～7.0g,NaCl 8.0～11.0g,pH值为自然,于103kpa、121℃高压蒸气灭菌30min；(3)将液体二级种子按发酵液体积3～9％的接种量接入液体产酶培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶结束；所述的液体产酶培养基为：葡萄糖75.0～85.0g,蛋白胨1.0～5.0g,KH₂PO₄1.4～2.0g,MgSO₄·7H₂O 0.7～0.8g,KCl 0.2～0.6g,pH值为5.6,于103kpa、121℃高压蒸气灭菌30min；(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集到的上清液即为粗酶液；(5)根据不同需要和使用对象不同，还可以将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的低温葡萄糖氧化酶制剂。