[发明专利]利用核苷酸类似物和解旋酶恒温扩增DNA分子的方法

摘要

本发明涵盖了一种恒温扩增特定序列的DNA分子的方法和流程。本发明是基于意外的发现，即本发明中的引物，在某些位置的核苷酸被非天然的核苷酸替代(“SAMRS核苷酸”)，例如：以2-氨基嘌呤或2，6-二氨基嘌呤替代腺嘌呤，以肌苷替代鸟嘌呤，以2-硫代胸腺嘧啶替代胸腺嘧啶，以N4-乙烷基胞嘧啶替代胞嘧啶，这些含有SAMRS核苷酸的引物能够被常规的解旋酶恒温扩增法(HDA)中的酶所接受和使用。进一步意想不到的结果是，目标核苷酸(DNA/RNA)能够在解旋酶恒温扩增法(HDA)中被含有SAMRS核苷酸的引物有效地扩增放大。同时，我们还发现，通过使用SAMRS-取代的引物能够减少恒温扩增法中的非特异扩增和引物自聚的副产物。

主权项

一种用于合成DNA分子的流程，该DNA分子互补于目标DNA分子，其中所述的目标DNA分子杂交与互补的DNA分子成为双螺旋，本专利所述的方法包括将双螺旋DNA孵育在缓冲水溶液中，缓冲液中有解旋酶，脱氧核糖核酸聚合酶，2'‑脱氧核苷三磷酸，和含有非天然核苷酸的引物，该引物的序列与目标DNA分子的一个序列片段基本上互补，并且在该引物中至少一种腺嘌呤被2‑氨基嘌呤或2，6‑二氨基嘌呤替代，或者引物中至少一个鸟嘌呤被肌苷取代，或至少有一个胸腺嘧啶被2‑硫代胸腺嘧啶取代，或者至少一个胞嘧啶被N4‑乙烷基胞嘧啶所取代，并且其中所述被替换的核苷酸的数目总数是2至6。