[发明专利]一种重组蛋白A亲和配基的定点固定化方法有效
申请号: | 201410546621.X | 申请日: | 2014-10-15 |
公开(公告)号: | CN104356238B | 公开(公告)日: | 2018-01-09 |
发明(设计)人: | 贾凌云;臧柏林;任军;徐丽 | 申请(专利权)人: | 大连理工大学 |
主分类号: | C07K17/08 | 分类号: | C07K17/08;C07K17/04;B01D15/20 |
代理公司: | 大连东方专利代理有限责任公司21212 | 代理人: | 贾汉生,李馨 |
地址: | 116024 辽*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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摘要: | 本发明提供一种重组蛋白A亲和配基的定点固定化方法。该方法是通过基因工程手段将FGE识别基因序列插入到编码目的蛋白质的基因序列末端,构建该目的蛋白质的表达载体,再将目的蛋白质与FGE在大肠杆菌中共表达,实现目的蛋白质的胞内醛基催化转化。再通过介质表面的酰肼基团与蛋白质表面醛基的选择性反应实现定点固定化。本发明的方法能够将目的重组蛋白从细胞破碎上清中直接固定,条件温和,步骤简单,大大减少固定化的时间与成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 重组 蛋白 亲和 定点 固定 方法 | ||
【主权项】:
一种蛋白质亲和配基的定点固定化方法,其特征在于,该定点固定化方法包括如下步骤:(1)蛋白质基因序列末端加入SEQ ID NO.1所示的基因序列,得到的基因序列连接入表达载体I中,得目的蛋白表达载体;(2)将步骤(1)得到的目的蛋白表达载体和连接入FGE蛋白质基因序列的表达载体II同时转化至宿主细胞,诱导蛋白表达;(3)收集菌体,破碎菌体后离心,得细胞上清液;(4)将步骤(3)得到的细胞上清液和带有活性酰肼基或氧氨基的固相色谱基质混合,加入催化剂,在pH 7、25~40℃下反应12~14小时,其中所述的催化剂为苯胺;在步骤(1)中所述的蛋白质基因序列为编码蛋白A的基因序列;在步骤(4)中所述的细胞上清液和带有活性酰肼基或氧氨基的固相色谱基质的体积比为1:1~1:3;所述的催化剂在反应体系中的浓度为50~100mM。
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- 徐寒梅;常海民;康志安 - 中国药科大学
- 2011-11-21 - 2012-04-18 - C07K17/08
- 本发明涉及药物领域,具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一种整合素阻断剂HM-3及其应用,此阻断剂是一种多肽,此多肽经过了聚乙二醇修饰,该修饰后的整合素阻断剂多肽可用于实体肿瘤的治疗。该整合素阻断剂在制备治疗肿瘤药物中的应用,其中所述的整合素阻断剂的序列和结构为mPEG-SC20k-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Arg-Gly-Asp,说明本发明设计的整合素阻断剂多肽科学、合理、可行有效,能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物,其极大拓展了该整合素阻断剂的治疗谱,为将来药物开发提供了新的思路和前景,具有显著的社会价值和市场价值。
- 制备聚乙二醇化碱性成纤维细胞生长因子的方法-201110261405.7
- 黄志锋;李校堃;叶朝辉;王晓杰;张翼;唐璐 - 温州医学院;黄志锋
- 2011-09-06 - 2012-01-25 - C07K17/08
- 本发明属于蛋白质修饰领域,具体而言,本发明提供了在色谱柱上制备聚乙二醇化碱性成纤维细胞生长因子(PEG-bFGF)的方法,其包括,将bFGF溶液上样于肝素-Sepharose亲和层析柱;用mPEG-丁醛溶液在避光状态下冲洗;用低盐缓冲液洗去杂质;用高盐缓冲液洗脱,收集含PEG-bFGF的流出液;将获得的流出液上样于分子筛层析柱,并用低盐缓冲液洗脱,收集含PEG-bFGF的流出液;和将获得的流出液上样于阳离子交换层析柱,收集用含NaCl的缓冲液洗脱的流出液。
- 一种增强小分子有机物的免疫原性的方法-201110132681.3
- 王小良 - 苏州良辰生物医药科技有限公司
- 2011-05-23 - 2011-12-28 - C07K17/08
- 本发明涉及一种增强小分子有机物的免疫原性的方法,其采用交叉连接器将所述小分子有机物与蛋白载体连接,特别是,所述的交叉连接器由线性聚合物在两端修饰活性基团构成,所述线性聚合物的摩尔质量为500~10000kDa。本发明采用具有特定结构的连接器,采取该连接器将小分子有机物和蛋白载体连接后,小分子有机物的抗原决定簇不容易被掩盖,从而其免疫原性显著增强。此外,本发明的连接器的制备也非常容易,方法简单,成本低。
- 一种脑啡肽类似物的聚乙二醇化衍生物-201110180878.4
- 赵铁华;文曙;王良友 - 河北师范大学
- 2011-06-29 - 2011-11-23 - C07K17/08
- 本发明公开了一种脑啡肽类似物的聚乙二醇化衍生物,其制备方法,含它们的组合物。本发明的脑啡肽类似物的聚乙二醇化衍生物由脑啡肽类似物和与脑啡肽类似物C端共价连接的聚乙二醇组成,其中脑啡肽类似物具有下式结构:X-Tyr-Y1-Gly-Phe-Y2-Y3-Z其中,X是H或Ac;Y1是D-Ala或Gly;Y2是D-Ala或Met或Leu;Y3是Cys或高Cys或Lys或Arg或His,是PEG修饰的残基;Z是OH或NH2。本发明给出的脑啡肽类似物的聚乙二醇化衍生物可用于制备镇痛药物或药物的前体化合物。
- 专利分类